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文献和实验Nature:哈佛大学董民团队利用昆虫细胞全基因组 CRISPR 筛选,揭示杀虫毒素受体
条件,有意思的是,人的同源蛋白 CD164 正好缺乏这一特征,这些发现在分子水平上解释了 Tc 毒素对宿主的选择特异性。 最后作者以果蝇作为昆虫宿主模型,发现 Visgun 蛋白主要在血细胞表达,而这些细胞正是昆虫的主要免疫系统。敲除 Visgun 蛋白可以降低原代血细胞对 pTc 毒素的敏感性,并且在被 pTc 毒素预处理后,这些血细胞依然保持吞噬细菌的能力。在被感染发光光杆状菌后, Visgun 蛋白敲除的果蝇也表现出较低的致死率和病原菌载量,这揭示出在病原菌感染的初期,低剂量的 Tc 毒素
一次性细胞培养皿等标明Tissue Culture Treated是什么意思
大部分动物细胞需要贴附在一个固相界面上才能生长。而只有亲水的固相界面,细胞才能贴附。最早的细胞培养器皿是由玻璃制作的。由于玻璃的表面是亲水的,不经过特殊的处理,普通的细胞就可以贴附生长。聚苯乙烯透光性能好,具有较好的强度和易塑性,并且没有毒性,成为一次性细胞培养皿和培养板等一次性细胞培养耗材的首选材料(一般的磁带和CD盒也是用聚苯乙烯制成的)。然而聚苯乙烯表面是憎水的,所以需要经过表面的改性处理,变成亲水后才能适用于细胞培养。一次性细胞培养皿等标明Tissue culture treated
。加入甘氨酸可以消除甲醛使交联反应终止。1.1.准备两个长满细胞的150cm2的细胞培养皿(1*107-5*107 个细胞/皿)。将甲醛直接滴入PBS洗过的细胞培养皿中,使其终浓度为0.75%,然后在室温缓慢旋转10分钟,使蛋白和DNA发生交联。1.2 加入甘氨酸使其终浓度为125mM,在室温晃动孵育5分钟。1.3 使用10ml预冷PBS清洗细胞2次1.4 使用细胞刮将细胞收获放入 5ml 预冷PBS中,并转入50ml的管子。1.5.在皿里加入3mlPBS,将剩余的细胞转移到50ml管子里1000g
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