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文献和实验、无 DNA 酶、无热原和 ATP 污染。 通常客户习惯自己去高温高压灭菌,但是高温高压灭菌过的吸头是不能完全保证去除生物污染。我们以「热原」举例,热原的耐热性能良好,180℃ 3~4 小时、200℃ 60 分钟或 250℃ 30~40 分钟方可使热原彻底破坏,而常规高温湿热灭菌 121℃ 30 分钟无法破坏热原活性。而且热原在日常环境中,甚至空气中随处存在,极易污染。 因此,要确保生物洁净需要在吸头生产过程中严格控制生物污染。具体可以从下面三方面考虑: 1、吸头原材料纯净无添加;
全长的RNA。而实验失败的主要原因是核糖核酸酶(RNA酶)的污染。RNA酶可耐受多种处理而不被灭活,如煮沸、高压灭菌等。研究人员造成的污染 RNA酶最主要的潜在污染源是研究人员的手。因此进行RNA实验时应勤换手套。但DEPC能与胺和巯基反应,因而含Tris和DTT的试剂不能用DEPC处理。(一)动植物总RNA提取-Trizol法 Trizol法适用于人类、动物、植物、微生物的组织或培养细菌,样品量从几十毫克至几克。用Trizol法提取的总RNA绝无蛋白和DNA污染。 RNA可直接
2. 枪头及EP管的处理 1) 0.1%DEPC水浸泡1~2w; 2) 用镊子夹起枪头一一装入枪头盒中,用镊子夹起EP管放入饭盒中; 3) 高压灭菌50min,45度烘箱烘干。 二、RNA的提取 Trizol法适用于人类、动物、植物、微生物的组织或培养细菌,样品量从几十毫克至几克。用Trizol法提取的总RNA绝无蛋白和DNA污染。 RNA可直接
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