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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
2-8℃
- 保质期:
1-3年
- 英文名:
ITTABIO
- 库存:
35
- 供应商:
北京伊塔生物科技有限公司
- CAS号:
125-62-6
- 规格:
100ml


一.常用贮液与溶液配置方法
- 1mol/L亚精胺(Spermidine): 溶解2.55g亚精胺于足量的水中,使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。
- 1mol/L精胺(Spermine):溶解3.48g精胺于足量的水中,使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。
- 10mol/L乙酸胺(ammonium acetate):将77.1g乙酸胺溶解于水中,加水定容至1L后,用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。
- 10mg/ml牛血清蛋白(BSA):加100mg的牛血清蛋白(组分V或分子生物学试剂级,无DNA酶)于9.5ml水中(为减少变性,
- 须将蛋白加入水中,而不是将水加入蛋白),盖好盖后,轻轻摇动,直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。
- 1mol/L二硫苏糖醇(DTT):在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水,分成小份贮存于-20℃。或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管,加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。
- 8mol/L乙酸钾(potassium acetate):溶解78.5g乙酸钾于足量的水中,加水定容到100ml。
- 3mol/L乙酸钠(sodium acetate):溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中,用冰乙酸调溶液的pH至5.2,再加水定容到100ml。
- 0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液(0.5mol/L),混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH,并溶于水中,定容至1L。
- 1mol/L HEPES:将23.8gHEPES溶于约90ml的水中,用NaOH调pH(6.8-8.2),然后用水定容至100ml。
- 1mol/L HCl:加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。
- 25mg/ml IPGT:溶解250mg的IPGT(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷)于10ml水中,分成小份贮存于-20℃。
- 1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2·6H2O于足量的水中,定容到100ml。
- 20mg/ml蛋白酶K(proteinase K):将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中,轻轻摇动,直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。
- 10mg/mlRnase(无DNase)(DNase-free RNase):溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中(pH 5.0)。溶解后于水浴中煮沸15min,使DNA酶失活。1mol/L的Tris-HCl调pH至7.5,于-20℃贮存。(配制过程中要戴手套)
- 10%SDS(十二烷基硫酸钠):称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。
- 2mol/L山梨(糖)醇(Sorbitol):溶解36.4g山梨(糖)醇于足量水中使终体积为100ml。
- 2.5% X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷):溶解25mg的X-gal于1ml的二甲基甲酰胺(DMF),用铝箔包裹装液管,贮存于-20℃。
电泳缓冲液
50×Tris-乙酸(TAE)缓冲液
成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量
2mol/L Tris碱 1mol/L 乙酸 100 mmol/L EDTA 水 242g 57.1 ml的冰乙酸(17.4 mol/L) 200ml的0.5 mol/L EDTA(pH 8.0) 补足1L
5×Tris-硼酸(TBE)缓冲液
成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量
445 mmol/L Tris碱 445 mmol/L 硼酸盐 10 mmol/L EDTA 水 54g 27.5g 硼酸 20 ml的0.5 mol/L EDTA(pH 8.0) 补足1L
染料
1%溴酚蓝(bromophenol blue)
加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中,搅拌或涡旋混合直到完全溶解。
1%二甲苯青FF(xylene cyanole FF)
溶解1g二甲苯青FF于足量水中,定容到100ml。
10mg/ml的溴化乙锭(ethidium bromide)
小心称取1g溴化乙锭,转移到广口瓶中,加100ml水,用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管,于4℃贮存。
凝胶上样液(gel loading solutions)
成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量
0.15%溴酚蓝 0.15%二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 15%聚蔗糖(400型) 水 1.5ml 1%溴酚蓝 1.5ml 1%二甲苯青FF 100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 1.5g 补足到10ml
6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存)
成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量
0.25%溴酚蓝 0.25%二甲苯青FF 15%聚蔗糖(400型) 水 2.5ml 1%溴酚蓝 2.5ml 1%二甲苯青FF 1.5g 补足到10ml
6×甘油凝胶上样液(4℃贮存)
成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量
0.15%溴酚蓝 0.15%二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 50%甘油 水 1.5ml 1%溴酚蓝 1.5ml 1%二甲苯青FF 100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 3ml 3.9ml
6×蔗糖凝胶上样液(室温贮存)
成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量
0.15%溴酚蓝 0.15%二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 40%聚蔗糖 水 1.5ml 1%溴酚蓝 1.5ml 1%二甲苯青FF 100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 4g 补足到10ml
10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液(室温贮存)
成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量
0.2%溴酚蓝 0.2%二甲苯青FF 200 mmol/L EDTA 0.1%SDS 50%甘油 水 20mg 20mg 4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 100ul 10% SDS 5ml 补足到10ml
三、常用抗生素配置方法
1. 氨苄青霉素(ampicillin)(100 mg/ml)
溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
2. 羧苄青霉素(carbenicillin)(50mg/ml)
溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
3. 甲氧西林(methicillin)(100mg/ml)
溶解1g甲氧西林钠于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。
4. 卡那霉素(kanamycin)(10mg/ml)
溶解100mg卡那霉素于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
5. 氯霉素(chloramphenicol)(25mg/ml)
溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以12.5ug/ml~25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
6. 链霉素(streptomycin)(50mg/ml)
溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
7. 萘啶酮酸(nalidixic acid)(5mg/ml)
溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
8. 四环素(tetracyyline)(10mg/ml)
溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中,或者将无碱的四环素溶于无水乙醇,定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光,于-20℃贮存。常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。









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文献和实验一、所需试剂 1. 2%丽春红S浓贮存液(3-羟基-4-[2-磺基-4-硫代-苯偶氮基]-2,7-萘二磺酸):溶于30%三氯醋酸和30%磺基水杨酸中。贮存液可在室温下稳定存放1年以上。 2. PBS。 二、操作步骤 1. 在染色之前,先配制丽春红S的应用液。即将2%的丽春红S浓贮存液用1%醋酸1:10稀释即成为应用液(注意:如果使用硝酸纤维膜,须将丽春红S应用液更换为用水1:10稀释); 2. 用丽春红S应用液将PVDF膜洗1次; 3. 加入新鲜稀释的丽春红S应用
转印后切取印迹膜 有时转印后需将印迹剪成较小的片状进行单独处理。单个泳道可以泳动同一样品,待彼此分开后,可用不同的抗体并列检测。如以电泳方向剪膜,就可在同一样品中检测不同分子大小的抗原。为了简便而精确地找到泳道,电泳之后用丽春红S(Ponceaus S)或印度墨汁对印迹膜进行染色,便可很快确定待测蛋白质的位置并将其剪下。表表明两种染料的的适用范围及优缺点,用丽春红S染色的优点是操作简便,价廉和具有可逆性,在封闭过程中,染色易消褪,且不干扰进一步的检测
蛋白样。 (1)用大的梳孔(产家一般制作梳子仅有2个孔:一个正常大小用于上标记(marker),另一个占了剩下的空间)。(2)不溶蛋白可以在变性条件下纯化。(3)甚至是水溶蛋白,用上样缓冲液纯化也可得到大量产物。注:如果你的蛋白带有大的标签如GST,MBP,NusA等,需要用这些标签蛋白做杂交来预清除血清中这些标签的抗体。2. 转移到PVDF或硝酸纤维素膜。注:如果蛋白分子量小,选择0.2 μm 孔径而不是45 μm。3. 用丽春红S溶液将膜染色并尽可能小的剪下含有抗原蛋白的条带
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