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胆酸cholic acid

  　　C24 H40 O5 3α， 7α， 12α三羟基 -5 β胆烷酸，是广泛分布于以人为首的脊椎动物中的最主要的胆汁酸。在胆汁中，以与甘氨酸或牛磺酸结合成甘胆酸（ glycocholic acid）或牛磺胆酸的形态存在。  

用于蛋白质表达和纯化的pET-32α（+）载体的构建

加热灭活酶。通过凝胶提取试剂盒纯化消化的pET-32α（+）载体骨架和从pMD18-T载体切下的基因片段。用T4 DNA连接酶在23℃下用pET-32α（+）载体骨架连接基因片段1小时，载体末端和插入末端的比例为1：3（fmol）。将10μl连接反应与100μl感受态大肠杆菌 BL21（DE3）在冰上混合10分钟，并将混合物在42℃下孵育90秒。加入800μlLB并在37°C下孵育40分钟。涂在含有100μg/ ml氨苄青霉素的LB平板上。在37°C孵育过夜。通过菌落PCR筛选插入物的存在或制备

CRISPR/Cas9 基因敲除实验 | 如何确定目标基因？

。在开始之前仍需要确认的信息在大数据筛选+文献确认之后，就要开始着手敲除事项，在这之前有一个非常重要的点在很多教程中都没有提及，包括我之前写的 sgRNA 设计推文 CRISPR-Cas9 基因敲除 sgRNA 设计常规情况下：敲除所有 isoform 都有的基因片段，以达到全敲的效果；在保证敲除所有 isoform 的基因片段之后，尽量敲往前一点，以免太过后面，导致后半部分虽然不完整，但仍有功能；来自我的好友喜糖的提醒，作为大段敲除，最好是之前敲掉是 3 的倍数的外显子，以达到移码的效果，使得该位点之后