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应用末端截切、进化、再延长技术提高酶稳定性的方法

：5'-TAGTCAAGCTTACTAGTGATGGTGATGGTGGCCACCATGCTTAATCAGTGAGGCACC-3’。 ( 7 ) 质粒 pKMENGRbla 是由 pAK400 衍生而来的 [26]。 ( 8 ) 限制性内切核酸酶 Sfi I 和 Hind lll。 ( 9 ) 质粒 p KJE_Bla-N△5：表达 TEM-1 β-内酰胺酶的 N 端前 5 个氨基酸残基缺失突变体（见 16.3.3) 。 ( 10 ) Pr_sfi_ pelB_DG_shuffl 的正向引物：5'-TTACTCACGGCCCAGCCGATGGCTGACG-3'，有下画线的是限制性内切

STANDARD PLANT MOLECULAR BIOLOGY PROTOCOLS

. autoclave, cool, and add: 1x MS vitamines (SIGMA #M-7150). Take 1ml of 1000x stock prepared by disolving 10.3gr in 100ml of water. antibiotic (kanamycin 50mg/l). Top agar: 1x Murashige&Skoog salts. 1% sucrose. adjust pH

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each) in the lavage solution. We have not had difficulty with infection using these techniques.MaterialsKetamine HCI injection (100 mg/ml ketamine)Xylazine injection (20 mg/ml)Animal support platformDepilatory Scalpel and disposable sterile bladesCotton swabs