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Intracellular Cytokine Staining Protocol

TimeRestimulationIntracellular BlockAntibodyIL-1aNEW!mouse PECmINFg (100ng/ml)(2h4)/LPS (100ng/ml)(22hr)2hr/22hr-MonensinALF-161IL-1bNEW!mouse PECmINFg (100ng/ml)(2h4)/LPS (100ng/ml)(22hr)2hr/22hr-MonensinB122IL-2mouse spleenConA (3ug/ml) (2d)/IL-2 (20ng/ml)+IL-4 (20ng/ml) (3d

流式细胞术检测人和小鼠Th细胞亚群

/Cytoperm液、Perm/Wash液和FACS Lysing Solution，均购自BD Pharmingen。（4）抗体细胞表面标记抗体：抗人CD3-APC，CD8-PercP，CD8-CYC，CD4-CYC。抗小鼠CD4-CYC、CD8PE。细胞内因子抗体：抗人IL-4-PE，IFN-γ-FITC。抗鼠IL-4-PE，IFN-γ-FITC。以上抗体均购自BD Pharmingen。2、实验方法（1）外周血单个核细胞的分离：取肝素抗凝正常人或者Balb/c小鼠外周血1.5ml。在试管内加入淋巴

激活的淋巴细胞内细胞因子的检测

69PE/CD3PerCP(BDIS Cat.No.340368)c. 以 FL3 设阈值 CD3 设门检测 CD69 ，胞内 CD69 染色阳性率应在 90% 以上。六、染色抗细胞因子抗体可以与细胞表面标志抗体联用以研究不同细胞亚群。 CD3PerCP ， CD4FITC ， CD8FITC 是 BDIS 研究 T 淋巴细胞亚群时最常用的组合。多数受试者的 CD4 ， CD14 ， CD56 抗原会因 PMA 的激活而有不同程度的下调