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- 2025年07月13日
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文献和实验Single tube confirmation PCR protocol
Polymerase. - Add 35 µl of the PCR mix to each of the 20 PCR tubes that already contain the 15 µl of primers and template. 110 µl 5 µl 10 x Taq buffer(see below) 11 µl 0.5 µl 20 mM dNTP's (0.2 mM) 11 µl 0.5 µ
. For DNA sequencing analysis of product, purify using QIAquick PCR purification kit (Qiagen), eluting the product in 30 microliters. Use ~6 microliters for DNA sequencing analysis. MATERIALS 0.2% SDS 10X Colony PCR buffer: 0.13 M Tris
【精华】vol 687 Chapter 4 巢式PCR侧翼序列测定实验
首先，什么是巢式PCR? 巢式PCR就是，先用一对靶序列的外引物扩增以提高模板量，然后再用一对内引物扩增以得到特异的PCR带，此为巢式PCR。若用一条外引物作内引物则称之为半巢式PCR。 为减少巢式PCR的操作步骤可将外引物设计得比内引物长些，且用量较少，同时在第一次PCR时采用较高的退火温度而第二次采用较低的退火温度，这样在第一 次PCR时，由于较高退火温度下内引物不能与模板结合，故只有外引物扩增产物，经过若干次循环，待外引物基本消耗尽，无需取出第一次PCR产物，只需降低
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