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- Enzymatics
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- 2025年07月15日
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文献和实验(equimolar or 2 or 3 X molar concentration of vector) water added to 18 µl 2) Heat the mixture at 45 ℃ for 5 min. to melt any annealed cohesive ends. 3) Cool on ice. Add ligase buffer ( ATP) 2 µl ligase 0.5 µl
1) The ligation mixture contains the following: vector (~100 ng) insert (equimolar or 2 or 3 X molar concentration of vector) water added to 18 µl 2) Heat the mixture at 45 ℃ for 5 min. to melt any annealed cohesive ends. 3) Cool on ice. Add
. For example: If DNA is OK for end-sequencing, then prepare 2 reactions for each BAC using T7 and SP6 primers (18mers). 1 reaction: 22.0 µl DNA 16.0 µl reaction mix (ABI/PE #402122) 2.0 µl 25 µM T7 or SP6 (T7 5'-ATTTAGGTGACACTATAG-3') (SP
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