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要想荧光定量 PCR 结果好，这些实验设置要点需记牢

光信号的收集，这是我们荧光定量 PCR 反应的关键。而同样的我们需要在哪一步来收集信息呢？其实我们只需要在扩增循环中的退火或延伸步骤采集荧光即可（图 8）。 图 8 退火/延伸步骤采集荧光信号 不正确的信号采集同样会造成扩增曲线的异常。如下图所示，客户使用 QuantStudio™ 6 仪器开展实验，实验结束后发现扩增曲线不显示且多组分图表现异常（图 9A，9B），更进一步排查其反应程序设置可以发现，在扩增循环阶段除了在退火/延伸步骤收集荧光外，95℃ 变性步骤的荧光采集开关也被打开了（图 9C

Digital Gene Expression by Tag Sequencing on the Illumina Genome Analyzer

) 10 mM dNTP mix (10 mM each dNTP; Invitrogen) GEX PCR Primers 1 and 2 (from Illumina Tag Profiling Sample Prep Kit, cat. no. FC‐102‐1005

Blackburn:Yeast Colony PCR

the samples on a PCR machine by incubating the tubes at 99C for 10 minutes. In the mean time, prepare the master mix for the PCR reaction. The boiled samples are stable at room temp for some time. Keep on ice or freeze for longer