NIBSC特约代理商|03/178 叶酸&B12-WHO标准

蛋白质定量分析

太浓，都必须将样本稀释后再测。2） 同一样本的若干不同稀释浓度，所测出来的最终蛋白质浓度会有差异，通常是以稀释度大者较为准确。方法步骤：1） 每槽先加好50 μL标准品 （#0, #1 … #5） 或未知样本 （X1, X2），以二重复加入96 孔滴定盘中，如图所示。微量滴定盘的使用2） 每槽再加入200 μL Dye-Reagent （d），在全部样本槽加完前，不要中断添加；同时小心避免气泡产生。3） 轻拍滴定盘一侧，使添加的各成份均匀混合，注意Dye-Reagent 密度较大，很容易沉积在下方

核酸电泳工作流程——5 大主要步骤

离 0.1-25 kb 范围内的核酸分子。聚丙烯酰胺形成的孔径较小，可用于分离小于1 kb 的核酸分子。某些情况下，可采用聚丙烯酰胺凝胶以获得片段小于 100 bp 的单碱基分辨率[1]。 表 1. 琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶之间的差异 2. 准备标准品和样品 a .核酸标准品选择 当运行凝胶时，含有已知大小的核酸参照样品通常被称为标准品、标记或分子量标准，用于目的样品大小的估计。在为给定样品选择合适的分子量标准时，需考虑如下因素: Ladde 类型（例如 DNA 或 RNA），片段结构(例如单链或双链

qPCR常见问题及其分析

的比值。△Rn：△Rn是Rn扣除基线后得到的标准化结果（△Rn=Rn-基线）。2.影响Ct值的关键因素模板浓度模板浓度是决定Ct的最主要因素。控制在一个合适范围内，使Ct在15-35之间。反应液成分的影响任何分子的荧光发射都受环境因素影响----比如溶液的pH值和盐浓度。PCR反应的效率PCR反应的效率也会影响Ct值。在PCR扩增效率低的条件下进行连续梯度稀释扩增，与PCR扩增效率高的条件下相比，可能会所产生斜率不同的标准曲线。PCR效率取决于实验、反应混合液性能和样品质量。一般说来，反应效率在90