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Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡检测方法

一、概述 在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧，细胞发生凋亡最早期，膜磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧，这一变化早于细胞皱缩、染色质浓缩、DNA片断化和细胞膜的通透性增加等凋亡现象。 AnnexinV是一种磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此AnnexinV被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。 碘化丙啶（Propidium Iodide,PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞

Annexin V-PI双染法

的膜通透性很差，因而只能标记坏死的细胞。在流式细胞 仪的结果中可见AnnexinV-FITO+)、PI”’细胞为凋亡细胞，而AnnexinV-FITC(+) 、PI(+) 为坏死细胞。AnnexinV-FITC-PI检测凋亡的商品化试剂盒的发展很成熟，标记的过程相当简单，效果也很好。试剂盒中一般包括标记好的AnnexinV-FITC、配好的PI染液(10mg／m1)和标记缓冲液(10X 0．1 mol／L Hepes／NaOH，pH7．4，1．4 mol／L NaCl，25 mmol／LCaCl2

关于PI（碘化丙啶）的讨论

作用。（35min） 4、1000rpm，5min离心，弃上清。（5min） 5、用3ml PI染液（50 g/ml）重悬细胞，4℃，避光染15min。（20min） 6、加入200  l异硫氰酸荧光素染液（1 g/ml乙醇溶液），4℃，避光染10min。（10min） 7、1000rpm，5min离心，弃上清。再用蒸馏水离心（1000rpm，5min）洗1次，悬浮于2ml生理盐水中。（15min） 8、进行FCM分析。DNA被PI着色，呈红色荧光，蛋白质被FITC着色呈绿色