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IMMUNOCYTOCHEMICAL IDENTIFICATION OF PROLIFERATING CELLS IN VASCULAR TISSUE (ANTI-BrdU); Diaminobenzadine (DAB) brown detection

from Vector DAB substrate kit (Catalog No. SK-4100), four drops DAB, two drops H2O2 , and two drops of Nickel from kit, in 15ml tube (wrap the tube in foil to protect the substrate from light) . Incubate in the dark for 20-30 min., stop color reaction

免疫纳米金与免疫酶结合的双重染色

按以下步骤进行免疫染色： 1. 含1%正常血清或1%BSA的PBS预孵育20～30分钟； 2. 两种特异性第一抗体(免疫自不同种属动物)的混合物4℃下孵育24～48小时；PBS漂洗3次，每次10分钟； 3. 与第一抗体种属相应的纳米金标记的IgGFab，片段和生物素标记的第二抗体的混合物室温孵育2小时或4℃下孵育12小时后PBS漂洗3次，每次10分钟； 4. ABC(1：100，Vector)室温孵育2小时后PBS漂洗3次，每次10分钟。之后PBS漂洗2次，每次10分钟

7 年分子克隆经验总结

，即切胶的那次电泳中，如果切成的条带很清晰，不拖泥带水，没有弥散，没有拖尾，那做回收、连接效果最好。相反，若有弥散、拖尾、不清楚、一团亮等情况就是切的不好，做后续实验成功率会降低。若真是效果很差建议改进体系重新切。 回收 回收可以用柱式试剂盒或手工法。柱式回收试剂盒：此类试剂盒适合各种长度 DNA，对黏性末端基本没有破坏，回收效率也不错。手工醇沉淀法步骤如下，把切得的胶弄碎，用 Tris-HCl 浸泡一段时间，吸出所有的液体，用酚抽提一遍，氯仿抽提一遍，加盐和醇醇沉，沉淀