NEB特约代理商|M0289S 热敏磷酸酶（AP）

【求助】XbaI和EcoRI双酶切构建时出现空载

为了避免自连，可以对酶切后的载体使用热敏磷酸酶（M0289）对载体去磷酸化，补加10x的热敏磷酸酶Buffer后该反应可以在 NEBuffer1，2，3，4和EcoRI Buffer中进行。反应完成后通过加热可以是蛋白失活，从而不需纯化便可以进行连接反应。 4.XbaI是典型的dam甲基化敏感内切酶，您可以分析您的载体序列，看是否是甲基化敏感，如果是甲基化敏感，那么您的载体肯定切不开，可以有两种解决方案：A.用甲基化缺陷型菌株转化提取质粒之后再做酶切,NEB有免费赠送的甲基

Nature 重磅：林圣彩院士团队七年攻坚！首次破解「神药」二甲双胍作用靶点之谜

截至目前，二甲双胍发挥作用的多种机制被提出。比如说，二甲双胍可以抑制肝细胞线粒体电子传递链的复合物 I，从而降低线粒体氧耗，并抑制三磷酸腺苷（ATP）的生成，使 AMP/ATP 比值升高。增加的 AMP 还可以抑制果糖-1,6-二磷酸酶-1 和腺苷酸环化酶，从而阻止糖异生；二甲双胍也被认为可以改变细胞氧化还原状态，从而增加 NAD+/NADH 比值，抑制糖异生底物的利用。 在二甲双胍的各种潜在效应物中，腺苷酸活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase , AMPK

操作篇：western blot 之发光鉴定

一般使用辣根过氧化物酶 HRP-ECL 发光法或碱性磷酸酶 AP-NBT/BICP 显色法。 1．HRP-ECL 发光法： 将 A、B 发光液按比例稀释混合。膜用去离子水稍加漂洗，滤纸贴角吸干，反贴法覆于 A、B 混合液滴上，熄灯至可见淡绿色荧光条带（5 min 左右）后滤纸贴角吸干，置于保鲜膜内固定于片盒中，迅速盖上胶片，关闭胶盒，根据所见荧光强度曝光。取出胶片立即完全浸入显影液中 1～2 min，清水漂洗一下后放在定影液中至底片完全定影，清水冲净晾干，标定