猪肝星状细胞永生化细胞

猪肝星状细胞永生化细胞保存：4℃保存一年，-20℃长期保存
用途：可用于科研实验培养某一类型细胞没有固定的培养条件。

/ SLAMF2 / BCM1 蛋白 (Fc 标签)
NLN     Protein    Human    重组人 Neurolysin / NLN 蛋白 (His 标签)
CSF2     Protein    Human    重组人 GM-CSF / CSF2 蛋白
CSF2     Protein    Human    重组人 GM-CSF / CSF2 蛋白
GALNT10     Protein    Human    重组人 GALNT10 / GalNAc-T10 蛋白 (His 标签)
DRAXIN     Protein    Human    重组人 DRAXIN 蛋白 (His 标签)
RGS1     Protein    Human    重组人 RGS1 蛋白 (His 标签)
CPVL     Protein    Human    重组人 CPVL / Carboxypeptidase 蛋白 (His 标签)
CD177     Protein    Human    重组人 CD177 / PRV-1 / PRV1 蛋白 (Fc 标签)
MUC1     Protein    Human    重组人 Mucin-1 / MUC-1 蛋白 (Fc 标签)
CXCL1     Protein    Human    重组人 CXCL1 / MGSA / NAP-3 蛋白
MAPK13     Protein    Human    重组人 p38 delta / MAPK13 蛋白 (Activated in vitro, GST 标签)
MAPK14     Protein    Human    重组人 p38 alpha / MAPK14 蛋白 (Activated in vitro, His 标签)
VEGFA     Protein    Human    重组人 VEGF121 / VEGF-A 蛋白
CSF3     Protein    Human    重组人 G-CSF / CSF3 蛋白 (isoform b)
RNF43     Protein    Human    重组人 RNF43 蛋白 (His 标签)
RNF43     Protein    Human    重组人 RNF43 蛋白 (Fc 标签)
KREMEN1     Protein    Human    重组人 KREMEN1 蛋白 (His 标签)
TNFRSF11A     Protein    Human    重组人 TNFRSF11A 蛋白 (Fc 标签)
MCEMP1     Protein    Human    重组人 MCEMP1 / C19orf59 蛋白 (Fc 标签)
ATP6V1F     Protein    Human    重组人 ATP6V1F 蛋白 (GST 标签)
PGK2     Protein    Human    重组人 Phosphoglycerate Kinase 2 / PGK2 蛋白 (His 标签)
ARF1     Protein    Human    重组人 ARF1 / ADP-ribosylation factor 1 蛋白 (His 标签)
TRIP10     Protein    Human    重组人 TRIP10 / Cip4 蛋白 (His 标签)
LPAL2     Protein    Human    重组人 LPAL2 蛋白 (Fc 标签)
NAGA     Protein    Human    重组人 NAGA / Alpha-N-acetylgalactosaminidase 蛋白 (His 标签)
CALCA     Protein    Human    重组人 CALCA / CGRP 蛋白 (Fc 标签)
KRAS     Protein    Human    重组人 K-Ras / K-Ras (12 Cys) 蛋白 (His 标签)
KRAS     Protein    Human    重组人 K-Ras / K-Ras (12 Asp) 蛋白 (His 标签)
LGALS7     Protein    Human    重组人 Galectin-7 / LGALS7 蛋白 (His 标签)
IL31     Protein    Human    重组人 IL-31 / IL31 蛋白 (His 标签)
CTF1     Protein    Human    重组人 Cardiotrophin-1 / CTF1 蛋白
IL5     Protein    Human    重组人 IL5 / Interleukin 5 蛋白
AMTN     Protein    Human    重组人 AMTN / Amelotin 蛋白 (Fc 标签)
EDNRB     Protein    Human    重组人 EDNRB / Endothelin B Receptor 蛋白 (Fc 标签)
DHRS9     Protein    Human    重组人 DHRS9 蛋白 (His 标签)
PRNP     Protein    Human    重组人 PRNP / Prion 蛋白 (Fc 标签)
IL17F     Protein    Human    重组人 IL-17F / IL17F 蛋白
CCL28     Protein    Human    重组人 CCL28 蛋白 (His 标签)
CLEC7A     Protein    Human    重组人 CLEC7A / Dectin-1 / CLECSF12 蛋白 (Fc 标签)
CISD1     Protein    Human    重组人 CISD1 / ZCD1 蛋白 (His 标签)
VSIG8     Protein    Human    重组人 VSIG8 蛋白 (Fc 标签)
PKLR     Protein    Human    重组人 PKLR / PKRL 蛋白 (His 标签)
猪肝星状细胞永生化细胞FAM20B     Protein    Human    重组人 FAM20B / Gxk1 蛋白 (Fc 标签)
EVI2A     Protein    Human    重组人 EVI2A 蛋白 (Fc 标签)
PRAP1     Protein    Human    重组人 PRAP1 / Proline-rich acidic protein 1 蛋白 (His 标培养操作
1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识 3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

注意事项：
1. 收到细胞后先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们。
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。
3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养，隔天再取出观察。此时多数细胞均会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常，请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活力，请拍下照片及时和我们，信息确认后我们为您再免费寄送一次。
4. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件。
5. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和公司技术部沟通交流。
6. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。
实验步骤：
1. 将解剖用的剪刀、镊子和刀片进行无菌消毒。
2. 将怀孕小鼠用颈椎脱位法处死，将其固定在解剖板上。
3. 用70％乙醇喷洒在小鼠的腹部进行消毒，用一把剪刀和一把镊子把孕鼠外皮剪开，用另外一把剪刀和一把镊子把内皮剪开，露出子宫，最后用第三把剪刀和镊子将子宫小心取出放在盛有PBS的玻璃平皿中，冲洗去血。
4. 用两把弯镊子将胚胎外的胞膜小心去除，然后夹掉头和内脏，将其余胚胎转移到一个装有30 mLPBS的50 mL离心管中，轻轻颠倒两次，倒掉PBS，再重复此步骤一次，留少许PBS，将胚胎转移到另一装有PBS的平皿中，用手术刀片将其切碎至可用微量移液器吸取。
5. 用200μL的微量移液器反复快速吹打平皿中的液体，放在15 mL离心管中，
4℃ 1500 r／min离心5 min，倒掉上清液，加10 mL胰蛋白酶，重悬沉淀，37℃水浴中消化30 min，且每隔5 min轻轻晃动，使之充分消化。
6. 将上层细胞悬液倒入一装有10 mL DMEM培养基的50 mL离心管中，用200目尼龙滤网过滤后，1 500 r／min离心5 min，弃去上清液。
7. 用移液管吸取30 mL DMEM培养基，让培养液沿离心管壁缓缓流入管底，1 500 r／min离心5 min，弃掉上清液。重复一次此步骤。 8. 将细胞沉淀用15 mL培养基悬起。细胞计数(8只14天胎鼠可获得(2～3)×107个细胞)。
9. 将3×106个细胞悬浮于15 mL含10％小牛血清的DMEM培养基中，接种到200 mL的培养瓶中。
10. 24 h后更换新鲜的含10％小牛血清的DMEM培养基。
11. 细胞长满后，弃掉培养基，用PBS小心冲洗，倒掉，加胰蛋白酶消化。
12. 轻轻晃动细胞培养瓶，见有细胞浮起，立即加入2 mL血清终止消化，用移液管把细胞轻轻悬起，混匀，使细胞成为单细胞悬液。
13. 1500 r／min离心5 min。弃掉上清液。加入10 mL含小牛血清的DMEM培养基，悬起细胞，按1：5传代。
14. 细胞再次长到覆盖率80％～90％，将其消化后，常规冻存(冻存液要现配)。
15. 实验结果：可拍照存留。