链霉亲和素 Streptavidin 9013-20-1 现

链霉亲和素 9013-20-1 链霉亲和素 9013-20-1,英文名称：Streptavidin，规格：1mg，品牌：伊塔生物，货号：YT00800，CAS:9013-20-1，
产品简介： 链霉亲和素是一种生物素结合蛋白，像亲和素一样，链霉亲和素具有高亲和力，每摩尔蛋白质 结合 4 摩尔生物素。链霉亲和素缺乏存在于亲和素上的碳水化合物侧链，因此，当依赖于形成亲和 素/生物素复合物的蛋白质应用中使用时，链霉亲和素常常表现出比亲和素更低的非特异性结合水 平。 本制品已广泛应用于包被免疫检测用微孔板，制备 SA 偶联酶制剂（如 SA-HRP、SA-AP 等）， SA 偶联荧光素（即荧光染料，如 SA-FITC，SA-Cy2，SA-Cy3 等）、SA 偶联磁珠等，进而参与酶联 免疫吸附和酶催化放大实验，免疫组化化学、亲和色谱填料制备、含 StrepTagⅡ标签（8-AA 寡肽） 的蛋白纯化、生物传感器、生物纳米微球、 预靶向制药研究和生物芯片被料等生物技术领域。
使用方法：（仅供参考）
1. 微孔板包被 1) 用碳酸钠缓冲溶液（pH 9.6）溶解冻干粉，将浓度稀释成 3-10ug/ml（客户可设定梯度进行实验） 注意：SA 等电点是 6.0。 2) 用移液器吸取 100ul/孔，4℃过夜包被或者 37℃包被 3h； 3) 洗涤：倒尽板孔中液体，加 200ul 洗涤液，静放三分钟，反复三次，最后将反应板倒置在吸水 纸上，使孔中洗涤液流尽，扣干。 4) 后续进入封闭、洗涤、抗原抗体结合流程。 5) 若不立即进入下游实验，包被板需要进行烘干保存时。包被前，将包被液中加入 20%蔗糖作为 活性保护剂。 2. 偶联磁珠（以羧基磁珠为例） A．磁珠表面羧基活化 1. 混匀磁珠后，取 100 µL 羧基磁珠到 1 mL 离心管中，磁性分离去除上清液，用 200 µL MEST 溶液（100 mM MES，pH 5.0，0.05% Tween 20）进行磁性分离洗涤 2 次，然后移除上清液；
2. 迅速加入新鲜配制的 100 µL EDC 溶液（10 mg/mL，以上述 MEST 溶液作分散剂）和 100 µL NHS（10 mg/mL，以上述 MEST 溶液作分散剂）溶液到装有磁珠的离心管中，漩涡混匀使磁珠充 分悬浮， 25℃活化 30 min，该期间保持磁珠的悬浮状态（可利用垂直混合仪进行颠倒混匀）；过上述步骤之后，磁珠表面的羧基已经活化，可以与带有伯氨基的生物配体进行共价偶联。（活化 状态不宜长时间保存，建议立即进行偶联）。 B．磁珠与生物配体的共价偶联 1. 磁性分离去除上清液，加入 50 µg~200 µg 生物配体（合适用量及浓度需要根据具体实验进 行优化，保持溶液 pH≈8.0，可加入 0.05% Tween 20 以提高磁珠分散性，避免缓冲体系中存在除 生物配体以外含有伯氨基的试剂），轻柔地混匀； 2. 25℃偶联 2 h，或 25℃偶联 1 h 后放置 4℃静置过夜，偶联期间保持磁珠的悬浮状态（可 利用垂直混合仪进行颠倒混匀）；
3. 离心管置于磁性分离架上磁性分离去除上清液，加入 200 µL PBST 溶液（pH 7.2，且含 1%BSA）重悬磁珠（可根据需要进行超声），25℃反应 1 h 封闭磁珠表面未反应的活化羧基基团， 该期间保持磁珠的悬浮状态（可利用垂直混合仪进行颠倒混匀）；
4. 离心管置于磁性分离器上磁性分离去除上清液，每次用 200 µL PBS 溶液（pH 7.2）或保存 溶液洗涤 3 次后， 重新悬浮于保存溶液中（可根据需要来确定保存溶液的加入量，以调整偶联配 体磁珠的浓度），保存于 4℃。

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使用方法：
1.建议使用浓度
哺乳动物细胞：1-10 μg/mL，最佳浓度需要杀灭曲线来确定；
大肠杆菌：LB琼脂培养基筛选稳定转化pac基因的大肠杆菌，使用浓度为125μg/mL。注：使用嘌呤霉素筛选大肠杆菌稳转株需要精确的pH值调节，而且受宿主细胞本身的影响。
用途：
1.抗肿瘤抗生素，在心脏线粒体DNA方面有阿霉素的效果。反相转录酶和RNA聚合酶的抑制剂，免疫抑制剂；可插入DNA链中。
注意事项:
1.用于细胞实验，溶解后，须用一次性针头滤器过滤除菌。
2.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
质量保证与免表声明:
1、我们保证向用户提供完全合格的产品。我们承诺随时为您提供专业的技术指导。
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实验方法：
1 选择适当的细胞接种浓度，一般情况下，96孔培养板的一内贴壁细胞长满时约有105个细胞。但由于不同细胞贴路后面积差异很大，因此，在进行MTT试验前，要进行预实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线，确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间，以保证培养终止致细胞过满。这样，才能保证MTT结晶形成酌量与细胞数呈的线性关系。否则细胞数太多敏感性降低，大少观察不到差异。