- ￥3990
- 沪震生物
- HZ95-29430
- 中国
- 2025年12月30日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
88
- 英文名：
Yersinia pseudotuberculosis
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海沪震实业有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50次
Yersinia pseudotuberculosis PCR Kit
产品及特点
假结核耶尔森菌(Yersinia pseudotuberculosis)会引起非洲猪瘟等急性、出血性、烈性传染病，其特征是发病过程短，最急性和急性感染死亡率高达100%，临床表现为发热(达40~42℃），心跳加快，呼吸困难，部分咳嗽，眼、鼻有浆液性或粘液性脓性分泌物，皮肤发绀，淋巴结、肾、胃肠粘膜明显出血，非洲猪瘟临床症状与猪瘟症状相似，只能依靠实验室监测确诊，对养猪业造成严重损害，因此快速检测假结核耶尔森菌具有重要意义。荧光定量PCR是检测传染性疾病的主流技术，本产品就是以染料法荧光定量PCR技术为基础开发的专门检测假结核耶尔森菌的试剂盒，它具有下列特点：
1.即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
2.引物和探针经过优化，灵敏性高。
3.提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4.特异性高，引物是根据假结核耶尔森菌高度保守区设计，不会跟其他病毒的DNA发生交叉反应。
5.本产品足够50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
本产品只能用于科研。
规格及成分
| 编号 | 成分 | 规格 |
| 试剂一 | 2×Probe qPCR MagicMix | 0.5 mL（本色盖） |
| 试剂二 | 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL（黄盖） |
| 试剂三 | 假结核耶尔森菌PCR引物 | 100 μL（白盖） |
| 试剂四 | 假结核耶尔森菌qPCR探针 | 100 μL（棕色管） |
| 试剂五 | 假结核耶尔森菌阳性对照2.0 (1×10E8拷贝/μL) |
50 μL（红盖） |
| 试剂六 | 核酸释释剂试用装 | 50次（2.5mL） |
| 使用手册 | 1 份 |
自备试剂：样品DNA。
使用方法 一、稀释标准曲线样品（以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
1.标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
2.用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同）。
3.在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
4.换枪头，在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
5.换枪头，在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
6.重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
7.如果有N个样品，最好设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。
8.用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的柱式病毒DNAout。本试剂盒免费赠送50次免DNA提取的核酸释放剂试用装，该释放剂的裂解液可以直接作为PCR模板，省略了DNA提取步骤。
三、Probe qPCR反应（20μL体系，在样品制备室进行）
9.如果只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于标准曲线样品。
10.在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加）：
| 成份 | N+2 个 样品管 |
PCR 阴性 对照管 |
标准曲线 样品管（2-7管） |
| 2×Probe qPCR MagicMix | 10μL | 10μL | 各10μL |
| 假结核耶尔森菌qPCR探针 | 2μL | 2μL | 各2μL |
| 假结核耶尔森菌 PCR引物混合液 |
2μL | 2μL | 各2μL |
| 待测样品DNA模板 | 6μL | 不加 | 不加 |
| 第7步所得标准曲线样品稀释液（2-7号） | 不加 | 不加 | 各6μL（2号样到2号管，3号样到3号管…） |
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 94℃ | 5 min |
| PCR 反应 （40 个循环） |
94℃ | 0.5 min |
| 55℃ | 0.5 min（采集FAM通道的荧光信号） | |
| 72℃ | 0.5 min | |
| 最后延伸 | 72℃ | 10 min |
12.如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。
13.如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于30。对待测样品，如果其Ct大于或等于40则为阴性，如果小于或等于35则为阳性。如果在35-40之间，则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性，如果小于40，则为阳性。
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文献和实验研究1、 产前诊断：人们对遗传性物质改变引起的遗传性疾病还无法治疗，到目前为止，还只能只能通过产前监测，减少病婴出生，以防止各类遗传性疾病的发生，如为减少X连锁遗传病患儿的出生，从孕妇的外周血中分离胎儿DNA，用实时荧光定量PCR检测其Y性别决定区基因是一种无创伤性的方法，易为孕妇所接受。2、 病原体检测：采用荧光定量PCR检测技术可以对淋球菌、沙眼衣原体、解脲支原体、人类乳头瘤病毒、单纯疱疹病毒、人类免疫缺陷病毒、肝炎病毒、流感病毒、结核分枝杆菌、EB病毒和巨细胞病毒等病原体进行定量测定。与传统的检测
如何获得高质量、高可信度的荧光定量PCR结果--高质量cDNA标准
高质量cDNA应保证无基因组DNA残留 在提取RNA的过程中，常常会有基因组DNA的残留，从而导致实验结果的不准确性或假阳性结果的出现。2008年，Nature Protocol的一篇关于荧光定量PCR实验研究的文章1中明确指出，在合成cDNA第一链之前应去除基因组DNA残留，以免cDNA中有基因组DNA的存在，影响高灵敏度的荧光定量PCR实验结果： 图1 那么，如何避免基因组DNA对荧光定量PCR结果的影响呢？对于真核生物，由于内含子的存在，可以选择
的后处理，完全闭管扩增和检测，同时采用了dUTPUNG系统，有效地防范了PCR扩增物的污染，避免假阳性结果，为临床提供可靠的诊断依据。 4、操作简便、耗时短。该法在特定的荧光PCR检测仪上进行扩增和检测，不需要进行电泳或杂交的操作，只需要2-3小时即可完成PCR过程，有利于提高报告出具的速度，无须人工判断，自动收集和分析数据，观察结果可靠。 实时荧光定量PCR检测，主要是在一定的反应体系中，通过首先查找到样本中结核杆菌的基因，并进而对基因上某高保守的特定区段进行体外快速高保真的复制增殖
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