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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
39
- 英文名：
Hypocrellin A
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海西格
- 保存条件：
低温保存
- 规格：
25mg
操作步骤 :
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
产品名称: 竹红菌甲素
英文名称 Hypocrellin A
规格: 25mg
分类 PCR荧光核酸试剂
下面就向大家介绍实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。
3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
PCR反应鉴定——PCR反应条件:
| 循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 94℃ | 5 min | 1 |
| 变性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
| 退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
| 延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
| 终延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
典型的PCR由
（1）高温变性模板；
（2）引物与模板退火；
（3）引物沿模板延伸三步反应组成一个循环，通过多次循环反应，使目的DNA得以迅速扩增。其主要步骤是：
将待扩增的模板DNA置高温下（通常为93℃-94℃）使其变性解成单链；
人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因两侧的两条单链互补结合，两个引物在模板上结合的位置决定了扩增片段的长短；
耐热的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入，以目的基因为模板从5’→3’方向延伸，合成DNA的新互补链。
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Ondansetron 9
PCR检测方法包括以下步骤：
(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；
(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。
其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。
步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
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文献和实验相关实验
人民永远友好。 梅是蔷薇科的一个乔木树种。最高可长到10米，一般为四五米。它的叶片呈阔卵形，带一长尾尖，叶柄上有两颗突起的腺体，所以容易辨认。花有五个花瓣或为五的倍数；花色有白、红、墨红、粉红等。花先叶而放，有清香。现在，人们已人工培育出200个以上的不同品种 。它们不仅颜色各异，而且花瓣的层数也不同，有单瓣(一层)和重瓣(二层以上)之分。单瓣的品种，花后多能结果，味极酸；重瓣的品种一般很少结果，主要供人观赏。 我国长江以南各地都栽种梅树，尤以浙江、江苏、安徽、湖北、湖南及四
在身体结构上并无特殊的防御能力，又喜集群，故容易遭到敌害鱼类掠食，只有规格较大时才能有较强的逃避能力。根据武汉东湖蒙古红鮊和翘嘴红鮊掠食鱼种情况的调查结果，l3cm以上的鲢、鳙鱼种才能免受全长50cm以内的两种鮊鱼掠食。 3、鱼种规格与拦鱼设施规格 如果放养的鱼种规格小，拦鱼栅的栅距或拦鱼网的网目就应相应缩小，否则必将导致严重逃鱼的后果。但是，这样做又会增加拦鱼设备的阻水面积，既影响过水效率，又增大了拦鱼设备上承受的压力。生产实践已经证明，在流水条件下，拦栅栅距l cm，拦网
制作方法 以江鱼生干为例加以说明。 1.原料选择：大尾鲜江鱼，鲜度要好，鱼体要呈银白色，鱼喉不可带红，鱼体不破烂，透明度强，以目明亮。 2.洗涤：首先将鲜江鱼用海水把体外粘液、杂质冲洗干净，在洗涤过程中要勤换清水和防止损伤鱼体，洗后沥干水分。 3.晒干：在未晒之前先把晒埕(水泥地晒场)打扫干净，鱼放落晒埕20分钟后就开始首次翻晒，隔30分钟翻晒第二次，以后每隔1小时翻一次。翻晒工具用细软竹尾捆成把轻轻地翻过，要注意防止断节搞破鱼体和翻晒不全面。晒干
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