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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
低温冷藏
- 保质期:
详见说明书
- 英文名:
RT-LAMP kit for dengue virus type 3
- 库存:
100
- 供应商:
上海莼试
- 规格:
50T
典型的PCR由
(1)高温变性模板;
(2)引物与模板退火;
(3)引物沿模板延伸三步反应组成一个循环,通过多次循环反应,使目的DNA得以迅速扩增。
其主要步骤是:
将待扩增的模板DNA置高温下(通常为93℃-94℃)使其变性解成单链;
人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因两侧的两条单链互补结合,两个引物在模板上结合的位置决定了扩增片段的长短;
耐热的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入,以目的基因为模板从5’→3’方向延伸,合成DNA的新互补链。
操作步骤 :
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
H1N1 Matrix Protein 1 A型禽流感病毒H1N1蛋白抗体
Hepatitis A virus polyprotein VP1 甲型肝炎病毒聚蛋白VP1抗体
HCLS1 造血干细胞特异性蛋白抗体
HIC5 转化生长因子β1诱导转录因子1抗体
HOXC6 同源盒蛋白C6抗体
HOXC4 同源盒蛋白C4抗体
HOXD13 同源盒蛋白D13抗体
Histone H1.4 组蛋白H1.4样蛋白抗体
H1FOO 组蛋白H1FOO抗体
HOXB6 同源盒蛋白B6抗体
Hamartin 错构素蛋白抗体
phospho-H1FOO (Ser20) 磷酸化组蛋白H1FOO抗体
HHV11 ICP22 单纯疱疹病毒1型转录调节因子ICP22抗体
H2A1J H2A组蛋白家族E蛋白抗体
H2BFM H2B组蛋白家族M蛋白抗体
H2BFWT H2B组蛋白家族成员W蛋白抗体(睾丸特异性)
HDGFL1 PWWP域包含蛋白1抗体
HDL 高密度脂蛋白抗体
HEATR1 HEAT重复内含蛋白1蛋白抗体
Haspin 丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶蛋白抗体
HAUS5 HAUS5蛋白抗体
HRH4/GPCR105 组织胺H4受体抗体
登革病毒3型RT-LAMP试剂盒HCM mRNA cap甲基转移酶抗体
HCE 5’-三磷酸聚核苷酸抗体
HINT1 组氨酸三聚体核苷结合蛋白1抗体
hCG alpha 4 甲状腺促进激素alpha链
H7N9 NA A型流感病毒H7N9凝集素抗体
HDAC3/HD3 组蛋白去乙酰化酶3抗体
HBsAg 人乙肝表面抗原抗体(包被)
HAVCR1 肾损伤分子1抗体(甲型肝炎病毒细胞受体1)
HPRG 组氨酸富含脯氨酸糖蛋白抗体
HER3 HER3受体抗体
Phospho-HER3 (Tyr1197) 磷酸化HER3受体抗体
Phospho-HER3 (Tyr1222) 磷酸化HER3受体抗体
Phospho-HER4 (Tyr1284) 磷酸化HER4抗体
Hemopexin 糖蛋白β-1B抗体
Phospho-HSP27 (Ser15) 磷酸化热休克蛋白27抗体
HEATR7A HEAT重复内含蛋白7A蛋白抗体
HPV16 E7 人乳头瘤病毒16型E7抗体
HER2 HER2抗体
HPL 人胎盘泌乳素抗体
HSP27 热休克蛋白27抗体
HMGA1 高迁移率族蛋白A1抗体
Phospho-HER2 (Thr686) 磷酸化HER2受体抗体
HSP20 热休克蛋白-20抗体
Hydroxyethyk starch 羟乙基淀粉抗体
H1N1 Matrix Protein 2 A型流感病毒H1N1-M2蛋白抗体
HIP12 亨丁顿舞蹈症相互作用蛋白12抗体
HHV11 DNA polymerase catalytic subunit 单纯疱疹病毒1型DNA聚合酶催化亚单位抗体
HBcAg(1H8) 人乙型肝炎核心抗原单克隆抗体
Phospho-HSP27(Ser78) 磷酸化热休克蛋白27抗体
His tag(CT) 聚组氨酸抗体g标签抗体(C端)
phospho-Histone H1.4 (Ser27) 磷酸化组蛋白H1,4样蛋白抗体
HER2 receptor HER2受体抗体
HCN4 环化核苷酸调控阳离子通道蛋白亚型4
HEATR8 HEAT重复内含蛋白8蛋白抗体
HN1L 雄激素调节样蛋白抗体
HN1 雄激素调节蛋白2抗体
S100A18 角化蛋白S100A18抗体
Hepatitis C Virus NS4B 丙型肝炎病毒NS4B抗体
HNRPC 异质性核糖核蛋白C1/C2抗体
hnRNP R 异质性核糖核蛋白R
HIPK4 同源相互作用蛋白激酶4抗体
HCF2 肝素辅助因子II抗体
HIRA 组蛋白替换精蛋白DGGR1抗体
HAPLN4 透明质酸及粘蛋白4抗体
Hippocalcin 神经细胞特异性钙结合蛋白抗体
Hairless 无毛发蛋白抗体
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。 3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
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文献和实验长度可达 20kb,适合于各种 GC 含量的扩增,可用于多种样本的直接 PCR 如植物叶片、全血等。且扩增仅需 30s/kb,甚至于 2kb/s。如此卓越,爱不释手了吧? 4. 选择直接扩增试剂盒对粗品扩增 vazyme 生产的各种直扩试剂盒,直接对粗品进行扩增,大大减少了实验的工作周期。如小鼠基因型鉴定可以直接使用 One Step Mouse Genotyping Kit,全血扩增可以直接使用 Blood Direct PCR Kit V2。
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长度DNA的混合物。且产物DNA为扩增靶序列的交替反向重复序列。3.LAMP的特点LAMP与以往的核酸扩增方法相比具有如下优点:(1)操作简单,LAMP核酸扩增是在等温条件下进行,对于中小医院只需要水浴锅即可,产物检测用肉眼观察或浊度仪检测沉淀浊度即可判断。对于RNA的扩增只需要在反应体系中加入逆转录酶就可同步进行(RT.LAMP),不需要特殊的试剂及仪器。(2)快速高效,因为不需要预先的双链DNA热变性.避免了温度循环而造成的时间损失.核酸扩增在l h内均可完成,添加环状引物后时间可以节省1/2,多数
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