油菜内标准cruciferin基因染料法PCR试剂盒

油菜内标准cruciferin基因染料法PCR试剂盒运输及保存：低温运输，-20℃保存，有效期一年。使用本试剂盒提供的阳性对照时，由于其浓度较高，一定要注意不要污染其他试剂和成分。最好在专门的区域操作。
需要自备的器材：
1．仪器：分析天平、离心机、荧光 PCR 扩增仪、组织研磨器、-20 ℃冰箱、可调移液器（2 µL、20 µL、200 µL、1000 µL）。
2．耗材：荧光 PCR 专用反应管、眼科剪、眼科镊、生理盐水、1.5 mL 经焦碳酸二乙酯（DEPC）水 处理的灭菌离心管、吸头（10 µL、200 µL、1000 µL）、灭菌双蒸水。

VCP    含缬酪肽蛋白抗体
VDAC    等电压依赖性阴离子通道抗体
phospho-VEGFR2    磷酸化血管内皮生长因子受体2抗体
Wnt1    信号通路Wnt1抗体
Wnt3a    信号通路Wnt3a抗体
Phospho-Wee1    磷酸化WEE1蛋白抗体
WDFY3    WDFY3蛋白抗体
WBP2    WBP2蛋白抗体
WNT7B    Wnt蛋白家族7B抗体
WASF2    WASF2抗体
Wnt8b    WNT蛋白家族Wnt8b抗体
WSTF    转录因子WSTF抗体
Wnt8A    信号通路WNT8A抗体
WNT2    信号通路Wnt2抗体
WNT4    信号通路Wnt4抗体
Wnt6    信号通路Wnt6抗体
WDR61    WD重复膜蛋白61抗体
WISP3    Wnt1信号通路蛋白3抗体
WASP    湿疹血小板减少伴免疫缺陷综合征相关蛋白抗体
WDR68    WDR68蛋白抗体
WDR91    WDR91蛋白抗体
WFDC5    P53应答基因蛋白5抗体
WDR19    WD重复膜蛋白19抗体
Phospho-Wee1    磷酸化WEE1蛋白抗体
WBSCR14    糖类应答元件结合蛋白ChREBP抗体
Wilms Tumor Protein    肾母细胞瘤蛋白抗体
Wnt16    信号通路Wnt16抗体
WDR23    WDR23蛋白抗体
TCAB1    端粒酶卡哈尔体蛋白抗体
WNT10B    信号通路WNT10B抗体
WAPL    EBV核蛋白2抗体
Wnt receptor    Wnt信号受体蛋白抗体
WAVE 1    富含脯氨酸同源蛋白1抗体
PPM1D    原癌基因WIP1抗体
WNT2B    信号通路Wnt2B抗体
WEE1 protein    WEE1蛋白抗体
WRCH-1    WRCH1抗体
WNK3 protein    丝氨酸/苏氨酸激酶家族成员的基因WNK3抗体
WNT9A    信号通路Wnt9a抗体
WISP1    Wnt1信号通路蛋白1抗体
WIPF2    WASP结合蛋白抗体
PAG608    野生型P53诱导基因1抗体
WASF3    Verprolin同源结构域包含蛋白3抗体
Wnt11    信号通路Wnt11抗体
WD SOCS box protein 2    信号传导抑制蛋白WD重复蛋特点：
1.即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板，操作简单，定量准确快速。
2. 引物经过优化，特异性强。预期的 PCR 产物长度为 560 bp。
3. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
4. 提供阳性对照，便于分析试验结果。
储存条件：
14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

油菜内标准cruciferin基因染料法PCR试剂盒检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
注意事项：
①加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。