小麦内标准waxy-D1基因探针法PCR试剂盒

小麦内标准waxy-D1基因探针法PCR试剂盒产品规格：50T
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年
产品特点：
本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏 PCR检测试剂盒 。

20号染色体开放阅读框160抗体
亲环蛋白（亲环素）40抗体
21号染色体开放阅读框56抗体
中性粒细胞杀菌蛋白BP30抗体
Cappuccino蛋白抗体
前列腺素过氧化物合成酶3抗体
补体因子H相关蛋白1抗体
羧肽酶CPN2抗体
钙/钙调素依赖蛋白激酶2D(CaMKIIδ)
电压依赖性钙通道Cav1.1抗体
CD20抗体
12号染色体开放阅读框40抗体
12号染色体开放阅读框42抗体
11号染色体开放阅读框46抗体
11号染色体开放阅读框67抗体
11号染色体开放阅读框77抗体
11号染色体开放阅读框16抗体
11号染色体开放阅读框21抗体
11号染色体开放阅读框24抗体
11号染色体开放阅读框53抗体
11号染色体开放阅读框57抗体
11号染色体开放阅读框65抗体
11号染色体开放阅读框71抗体
11号染色体开放阅读框74抗体
12号染色体开放阅读框4抗体
12号染色体开放阅读框24抗体
12号染色体开放阅读框29抗体
12号染色体开放阅读框49抗体
12号染色体开放阅读框50抗体
12号染色体开放阅读框53抗体
12号染色体开放阅读框54抗体
磷酸化钙调节素抗体
细胞分裂相关蛋白CSTF64抗体
磷酸化细胞分裂相关蛋白CSTF64抗体
CD3抗体
CD4抗体
CWF19L1蛋白抗体
心动加速蛋白多肽抗体
毒蕈碱型乙酰胆碱受体M3抗体
钾通道相互作用蛋白3抗体
氯离子通道调节蛋白1A抗体
磷酸化心肌肌钙蛋白抗体
4号染色体开放阅读框3抗体
组织蛋白酶S抗体
前列腺雄激素抑制信号蛋白1抗体
细胞死亡诱导蛋白抗体
细胞质脆性X智力低下蛋白结合蛋白2抗体
细胞角蛋白12抗体
4号染色体开放阅读框17抗体
1号染色体开放阅读框191抗体
酪蛋白激酶δ1抗体
活化白细胞粘附分子抗体
睫状神经营养因子抗体
柯萨奇病毒A16型聚合酶3D
细胞表面趋化因子受体3抗体
小麦内标准waxy-D1基因探针法PCR试剂盒补体C2抗体
造血干细胞抗原CD133抗体
内毒素受体抗体



产品特点：
1. 使用化学修饰的热启动聚合酶，反应特异性高，*程度地避免了非特异扩增；
2. 反应缓冲液经充分优化，反应灵敏快速，40个循环只需20多分钟；
3. 抗干扰能力强，反应重复性高，适合对土壤、粪便、肿瘤和血液来源的复杂样本中的靶基因进行检测分析。 在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，zui后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
 特异性荧光标记：
 TaqMan法
 TaqMan探针的特性：
（1）5′端标记有报告基团（Reporter, R），如FAM、VIC等
（2）3′端标记有荧光淬灭基团 （Quencher, Q）
（3）探针完整，R所发射的荧光能量被Q基团吸收 ，无荧光， R与Q分开，发荧光
（4）Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性，可水解探针 相对定量通过内标定量：
内标（Endogenous Control）通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因，在细胞中的表达量或在基因组中定，受环境因素影响小，内标定量结果代表了样本中所含细胞或基因组数量。
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表： 试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量 荧光PCR反应液 14µL N×14µL 酶混合物 1 µL N×1 µL 总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

实验方法步骤：
方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。      10×PCR buffer 
                  5 μl     dNTP mix （2mM）   
          4 μl     引物1（10pM） 
                2 μl     引物2（10pM） 
                2 μl     Taq酶 （2U/μl）
                1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）
   1 μl      加ddH2O至 50 μl 
  视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。
3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
PCR实验步骤
典型的PCR由（1）高温变性模板；（2）引物与模板退火；（3）引物沿模板延伸三步反应组成一个循环，通过多次循环反应，使目的DNA得以迅速扩增。其主要步骤是：
将待扩增的模板DNA置高温下（通常为93℃-94℃）使其变性解成单链；
人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因两侧的两条单链互补结合，两个引物在模板上结合的位置决定了扩增片段的长短；
耐热的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入，以目的基因为模板从5’→3’方向延伸，合成DNA的新互补链。