- ￥2490
- 康朗生物
- 中国/德国
- KL14-64700
- 2025年07月07日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
‘-20℃保存
- 保质期：
有效期一年
- 库存：
30
- 供应商：
上海康朗生物科技有限公司
- 规格：
50次
PCR使用方法：
2. 如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。如果用本试剂盒自带的 DNA 释放剂试用装。则按下面步骤操作：
3. 配制溶液 A 工作液。以配制 1mL 工作液（足够 10 个样品）为例：在一干净塑料
管中加入 10uL 溶液 A 成分一，20uL 溶液 A 成分二和 970uL 超纯水，充分混合均匀即可。溶液 A 工作液可室温放置，但最好在一周内用完，不要长期放置。一次检测一个样品需要 100uL 溶液 A 工作液，1mL 工作液足够 10 个样品。如果待测样品数量为其他数字，配制的溶液 A 工作液的体积需要做相应的调整。
4. 在标记好的 N+2 个离心管中，加入 1-5mg 固体样品（半粒芝麻大小，如奶酪）或5uL 液体样品（如牛奶）待测样品。在样品制备阳性对照中加入 5uL 阳性对照，在样品制备阴性对照中加入 5uL 水。
5. 在每个管中加入 100 uL 溶液 A 工作液，确保固体样品被溶液淹埋，如果是液体样品则震荡混匀。
6. 95℃保温 10 分钟。
7. 待冷却到常温后加入 10uL 溶液 B 并混匀得 DNA 释放液。每个样品得到的 DNA释放液足够进行 50-100 次 PCR。
二、设置 PCR 反应（40 uL 体系）
8. 在 N+2 个 PCR 管中加入下列成分，下面以样品数为 1 举例（注意：如果第一次使用DNA 释放剂，最好每个样品设置两个模板用量的 PCR 反应，两个反应的模板使用量差 10 倍，由此确定最佳用量，以后就用效果好的那个模板用量）：
| 成份 | 样品（用量1） | 样品（用量2） | 阳性对照 | 阴性对照 |
| 即用型 PCR Mix 3.0 | 20 uL | 20 uL | 20 uL | 20 uL |
| PCR 引物混合液 | 2 uL | 2 uL | 2 uL | 2 uL |
| 制备的样品 | 18 uL | 2 uL | 无 | 无 |
| 样品制备阳性对照 | 不加 | 不加 | 2 uL | 不加 |
| 样品制备阴性对照 | 不加 | 不加 | 不加 | 2 uL |
| 超纯水 | 不加 | 16 uL | 16 uL | 16 uL |
9. 轻柔混匀后上机，按下面参数进行 PCR。
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 94℃ | 10分钟 |
| PCR 反应 （35 个循环） |
94℃ | 45s |
| 56℃ | 45s | |
| 72℃ | 45s | |
| 延伸 | 72℃ | 5分 |
10. 电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 121bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩增
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文献和实验CLSI推荐需氧菌耐药表型总结如下：CLSI推荐的需氧菌耐药表型革兰阳性菌耐药表型分为葡萄球菌属、肠球菌属、肺炎链球菌属三大类。葡萄球菌属包括青霉素耐药和ß-内酰胺酶、甲氧西林/苯唑西林耐药、万古霉素的耐药性，诱导性克林霉素的耐药；肠球菌属为青霉素/氨苄西林耐药、万古霉素抗药、高水平氨基糖苷耐药；肺炎链球菌有青霉素和第三代头孢菌素耐药。革兰阴性菌耐药表型包含超广谱β-内酰胺酶、AmpC酶、碳青霉烯酶。CLSI推荐预测基因型药敏试验方法革兰阳性菌耐药表型检测方法革兰阳性菌耐药表型分为葡萄球菌属、肠球菌
因素是近年来大量使用超广谱抗生素、万古霉素和口服万古霉素的结果。 1．青霉素/氨苄西林耐药性：肠球菌β-内酰胺酶的产生很少，只有约10％。纸片药敏试验可以准确地检测出有低亲和力青霉素结合蛋白(PBPs)改变的菌株，但不能可靠地检出产β-内酰胺酶的菌株。对这些少见的产β-内酰胺酶的菌株最好用以头孢硝噻吩为底物的直接β-内酰胺酶试验检测。但作药敏试验的菌株仅选自血液、脑脊液等无菌部位分离的菌株。肠球菌对青霉素/氨苄西林产生耐药性，主要是由于低亲和力青霉素结合蛋白(PBPs)的产生和细胞
ESBLs是英文Extended-Spectrum β-lactamase的缩写，中文意思是超广谱β-内酰胺酶，它是当前抗生素出现的新的耐药趋势之一。 目前大肠埃希氏菌（大肠杆菌）、肺炎克雷伯氏菌是最常见的产ESBLs菌株的细菌，其次，阴沟肠杆菌、粘质沙雷氏菌、弗劳地枸橼酸菌、铜绿假单孢菌也可出现产ESBLs菌株的细菌。 肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌和大肠埃希菌中ESBLs检测的筛选与确证试验 方法
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