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- 2025年12月13日
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文献和实验700μl，连续装柱、离心。(注：每柱最多回收25~30μgDNA) d)加入300μlBindingbuffer，室温下，10,000rpm离心10min，弃上清。 e)每管加入700μl的无水乙醇稀释的spwbuffer到柱中，静置3min，室温下，10,000rpm离心1min。 f)弃上清，10,000rpm离心空管1min。 g)转移柱至一个干净的1.5ml离心管中，每管加20μlDNAElutionbuffer，室温下，10,000rpm离心1min。上清夜即为纯化的DNA
（只有上游T7无下游SP6）：T7+目的基因-R pEGFP（MCS两侧无通用序列）：自己设计靠近两侧的特异性引物（也可以求助 于测序公司，如：上海英骏/Invitrogen，他们有绝大多数载体的测序用的引物序列） 仔细的阅读你的载体图，选择针对阳性重组子的特异性引物组合 2. 菌落的处理 （我用的是质粒小提，用15ml离心管摇菌，通常加5ml培养基） 挑取新鲜菌落于含抗性的（LB）培养基中 37°C 200rpm摇床 摇2-4小时
-RAD）， PCR仪 My Cycler （Bio-RAD），Direct-Pure UP 超纯水系统（RephiLe），核酸电泳仪 EPS100 (上海天能)。细菌基因组 DNA 提取试剂盒（Axygen），dNTP （Takara）三、试验方法1. 样品制备和增菌培养 接种前，先将增菌培养基煮沸 10 ~ 15 min，以排除溶解于培养基中的氧，并迅速冷却，切勿摇动。每 15 ml 增菌肉汤中接种 1 ~ 2 g 固体食品或 1 ~2 ml 液体食品，接种时将接种物慢慢接入肉汤液面以下。每份样品接种
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