Procollagen galactosyltransfer

Procollagen galactosyltransferase 1 ELISA Kit需要而未提供的试剂和器材
1. 酶标仪（450nm）
2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱
4. 蒸馏水或去离子水

活化因子)     0.1ml
OPGL/RANKL/ODF  骨保护蛋白配体抗体(破骨细胞分化因子)     0.1ml
OPN/BSP  骨桥蛋白抗体(分泌型磷蛋白1)人     0.1ml
OPN/BSP  骨桥蛋白抗体(分泌型磷蛋白1)     0.1ml
Sigma1R  衰老相关基因8蛋白抗体     0.2ml
Orexin-A  增食欲素A/欲激素A     0.1ml
OSM/Oncostatin M  抑瘤素M抗体     0.1ml
OSMR/OSMRB  抑瘤素M受体抗体     0.1ml
Osterix  成骨相关转录因子抗体     0.1ml
OXCT1  含氧酸辅酶A转移酶1抗体     0.2ml
Os05g0477200 protein  水稻白叶枯病菌Os05g0477200蛋白抗体     1ml
Oxytocin R  催产素受体(缩宫素受体)抗体     0.1ml
OVA/SerpinB8  鸡卵白蛋白/卵清蛋白抗体     0.1ml
CD200R/Orexin receptor  丘脑分泌素受体抗体（食欲素受体）     0.1ml
P2X2/ATP receptor  嘌呤受体P2X2抗体     0.1ml
P2RX3/ATP receptor  嘌呤受体P2X3抗体     0.1ml
RBBP5  视网膜母细胞瘤结合蛋白5抗体     0.2ml
RBBP6/P2P-R  增殖潜能相关蛋白抗体     0.1ml
P14ARF  抑癌基因p14抗体     0.1ml
CDKN2A/P16  抑癌基因p16抗体     0.1ml
phospho-CDKN2A/P16 (Ser140)  磷酸化抑癌基因p16抗体     0.1ml
phospho-CDKN2A/P16 (Ser152)  磷酸化抑癌基因p16抗体     0.1ml
phospho-CDKN2A/P16 (Ser8)  磷酸化抑癌基因p16抗体     0.1ml
CDKN2A/p19ARF  p19ARF抑癌基因抗体     0.1ml
P21/CDKN1A  p21蛋白抗体     0.1ml
phospho-CDKN1A/P21 (Thr145)  磷酸化p21蛋白抗体     0.1ml
phospho-CDKN1A/P21 (Thr57)  磷酸化p21蛋白抗体     0.1ml
phospho-CDKN1A/P21 (Ser146)  磷酸化p21蛋白抗体     0.1ml
phospho-CDKN1A/P21 (Ser130)  磷酸化p21蛋白抗体     0.1ml
CDKN1B/P27kip1  P27抗体/周期素依赖激酶抑制剂     0.1ml
phospho-CDKN1B/P27kip1 (Ser10)  磷酸化P27抗体/周期素依赖激酶抑制剂     0.1ml
phospho-CDKN1B/P27kip1 (Thr157)  磷酸化P27抗体/周期素依赖激酶抑制剂抗体     0.1ml
phospho-CDKN1B/P27kip1 (Thr187)  磷酸化P27抗体/周期素依赖激酶抑制剂抗体     0.1ml
phospho-CDKN1B/P27kip1 (Ser178)  磷酸化P27抗体/周期素依赖激酶抑制剂抗体     0.1ml
phospho-CDKN1B/P27kip1 (Thr198)  磷酸化P27抗体/周期素依赖激酶抑制剂抗体     0.1ml
P2Y1R/P2ry1  P2Y1受体抗体/嘌呤受体抗体     0.1ml
P2Y4  P2Y4受体抗体     0.1ml
P311 protein  神经再生相关蛋白抗体     0.1ml
P4HB  蛋白二硫键异构酶P4HB抗体     0.2ml
p38MAPK/MAPK14/p38Alpha  丝裂原活化蛋白激酶p38α抗体     0.1ml
P38 MAPK(Phospho-Thr180/Tyr182)  磷酸化-丝裂原活化蛋白激酶p38抗体（P-p38 MAPK）     0.1ml
phospho-p38 MAPK/MAPK14(Thr180/Tyr182)  磷酸化丝裂原活化蛋白激酶p38抗体     0.1ml
Procollagen galactosyltransferase 1 ELISA KitMKK3/MEK3  丝裂原活化蛋白激酶MKK3抗体     0.1ml
Phospho-MKK3(Ser189)/MKK6(Ser207)  磷酸化丝裂原活化蛋白激酶MKK3/6抗体     0.1ml
MEK5/MAP2K5  丝裂原活化蛋白激酶激酶5抗体     0.1ml
phospho-MEK5(Ser142)  磷酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶5抗体     0.1ml
SEK1/MKK4  丝裂原活化蛋白激酶激酶4抗体     0.2ml
Phospho-MKK4(Ser80)  磷酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶4抗体     0.1ml样本处理及要求
1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
4. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

实验材料与试剂配制：
1. 仪器与材料：酶标仪（使用前预热30分钟），微量加液器、吸头、蒸馏水或去离子水，滤纸。
2. 缓冲液使用：加5ul 的缓冲液于50ul 的样品中，如果样品量不够或者不确定，缓冲液和样品的混合比例不要小于1:10即可。
混匀，静置1小时备用（如果标本是血清或者血浆，此步骤忽略）。
3. 洗液的配制：按1:100的比例配制洗液备用。
操作步骤：
1. 取出试剂盒，室温（20-25℃）放置 30 分钟。 2. 分组：取出 96 孔板，根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数，把剩余的板条继续冷藏处理。分别设标准品组（6 个浓度）、空白孔、待测样品组。
注：为减少实验误差，保证准确性，建议设置复孔。
3. 加样：依照标准品的顺序分别加入 50ul 的标准品溶液于空白微孔中；空白对照孔加入 50ul 的蒸馏水；其余微孔中加入 50ul的待测样本。
4. 加酶标溶液：标准品组、待测样本组各孔中加入 100ul 的酶标溶液（空白对照孔除外）。
5. 温育：酶标板用封板纸密封后，放入湿盒内于 37℃恒温孵育 1 小时。
6. 洗板：用稀释后的洗涤液注满每孔，静置 15-30s，充分清洗酶标板 5 次，用吸水纸彻底拍干。 7. 显色：各孔加入显色剂 A 液 50ul 后，再加入显色剂 B 液 50ul。
8. 终止：25-37℃下避光反应 10-15 分钟，加入 50ul 终止液。
9. 读板：在 450nm 波长读取各孔的 OD 值。