Myeloid differentiation primar

Myeloid differentiation primary response protein MyD88 ELISA Kit需要而未提供的试剂和器材
1. 酶标仪（450nm）
2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱
4. 蒸馏水或去离子水

HER2 receptor(1A4)   HER2受体单克隆抗体     0.1ml
Phospho-HER3 (Tyr1197)  磷酸化HER3受体抗体     0.1ml
Phospho-HER3 (Tyr1222)  磷酸化HER3受体抗体     0.1ml
Phospho-HER3 (Tyr1289)  磷酸化HER3受体抗体     0.1ml
Phospho-HER3(Tyr1328)  磷酸化HER3受体抗体     0.1ml
Hes5  发状分裂相关增强子-5抗体     0.2ml
Hepatitis E Virus ORF3   戊型肝炎病毒抗体     0.1ml
HGF  肝细胞生长因子抗体     0.1ml
Polyprotein(Hepatitis G Virus)  庚型肝炎病毒多聚蛋白抗体     0.1ml
hHBrk1  微丝相关蛋白hHBrk1抗体     0.1ml
HHV4/CMV  人类巨细胞病毒抗体     0.2ml
membrane glycoprotein E(VZV)  人水痘带状疱疹病毒gE蛋白抗体     0.2ml
HHV8/ORF K2  人类疱疹病毒8抗体/疱疹病毒8型     0.1ml
HHV8/ORF50  人类疱疹病毒8抗体     0.2ml
HHV8/ORF50  人类疱疹病毒8抗体     0.2ml
HHV8/ORF50  人类疱疹病毒8抗体     0.2ml
HHV8/ORF K2  人类疱疹病毒8抗体     0.2ml
HIF-1 Alpha  缺氧诱导因子1α 抗体HIF-1α     0.1ml
HIF-1β/ARNT1  缺氧诱导因子1β 抗体     0.1ml
HIF 2α  缺氧诱导因子2α 抗体HIF-2α     0.1ml
HIF3 alpha  缺氧诱导因子3α/HIF-3α抗体     0.1ml
HINT1  组氨酸三聚体核苷结合蛋白1抗体     0.2ml
HIRA/DGGR1  组蛋白替换精蛋白DGGR1抗体     0.1ml
Histone H3  组蛋白H3抗体     0.1ml
Phospho-Histone H3 (Ser10)  磷酸化组蛋白H3抗体     0.1ml
Phospho-Histone H3 (Ser28)  磷酸化组蛋白H3抗体     0.1ml
Phospho-Histone H3 (Thr11)  磷酸化组蛋白H3抗体     0.1ml
Phospho-Histone H3 (Thr3)  磷酸化组蛋白H3抗体     0.1ml
Histone H3 (tri methyl K36)   三甲基化组蛋白H3抗体     0.1ml
Histone H3 (Di Methyl K36)  二甲基化组蛋白H3抗体     0.1ml
Histone H3 (Di Methyl K4)  二甲基化组蛋白H3K4抗体     0.1ml
Histone H3 (Di Methyl K9)  二甲基化组蛋白H3K9抗体     0.1ml
Phospho-Histone H3(Ser28)  磷酸化组蛋白H3抗体     0.1ml
Histone H3 (Di Methyl K27)  三甲基化组蛋白H3抗体     0.1ml
Acetyl-Histone H3(K23)  乙酰化组蛋白H3抗体     0.2ml
Acetyl-Histone H3(K18)  乙酰化组蛋白H3抗体     0.2ml

样本处理及要求
1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
4. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

实验材料与试剂配制：
1. 仪器与材料：酶标仪（使用前预热30分钟），微量加液器、吸头、蒸馏水或去离子水，滤纸。
2. 缓冲液使用：加5ul 的缓冲液于50ul 的样品中，如果样品量不够或者不确定，缓冲液和样品的混合比例不要小于1:10即可。
混匀，静置1小时备用（如果标本是血清或者血浆，此步骤忽略）。
3. 洗液的配制：按1:100的比例配制洗液备用。
Myeloid differentiation primary response protein MyD88 ELISA Kit操作步骤：
1. 取出试剂盒，室温（20-25℃）放置 30 分钟。 2. 分组：取出 96 孔板，根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数，把剩余的板条继续冷藏处理。分别设标准品组（6 个浓度）、空白孔、待测样品组。
注：为减少实验误差，保证准确性，建议设置复孔。
3. 加样：依照标准品的顺序分别加入 50ul 的标准品溶液于空白微孔中；空白对照孔加入 50ul 的蒸馏水；其余微孔中加入 50ul的待测样本。
4. 加酶标溶液：标准品组、待测样本组各孔中加入 100ul 的酶标溶液（空白对照孔除外）。
5. 温育：酶标板用封板纸密封后，放入湿盒内于 37℃恒温孵育 1 小时。
6. 洗板：用稀释后的洗涤液注满每孔，静置 15-30s，充分清洗酶标板 5 次，用吸水纸彻底拍干。 7. 显色：各孔加入显色剂 A 液 50ul 后，再加入显色剂 B 液 50ul。
8. 终止：25-37℃下避光反应 10-15 分钟，加入 50ul 终止液。
9. 读板：在 450nm 波长读取各孔的 OD 值。