Neutrophil collagenase ELISA K

Neutrophil collagenase ELISA Kit需要而未提供的试剂和器材
1. 酶标仪（450nm）
2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱
4. 蒸馏水或去离子水

样本处理及要求
1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
4. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

抗体
Phospho-FRA1 (Ser265)    磷酸化FRA-1蛋白抗体
Phospho-FADD (Ser191)    磷酸化Fas相关死亡结构域蛋白抗体
Phospho-FLG (Tyr766)    磷酸化碱性成纤维细胞生长因子受体1抗体
Phospho-FOXO1 + FOXO3 + FOXO4 (phospho T24 + T32)    磷酸化叉头蛋白家族抗体
Phospho-FoxO3a (Ser318 + Ser321)    磷酸化叉头蛋白3A抗体
Phospho-FoxO3a (Ser294)    磷酸化叉头蛋白3A抗体
Phospho-FoxO3a (Ser253)    磷酸化叉头蛋白3A抗体
Phospho-FoxO1 (Ser319)    磷酸化叉头蛋白家族1抗体
Phospho-FoxO1 (Ser256)    磷酸化叉头蛋白家族1抗体
FOXO4    叉头蛋白O4抗体
Phospho-FoxO4 (Ser193)    磷酸化叉头蛋白4抗体
FLT-3    FMS样酪氨酸激酶3
Phospho-FLT3(Tyr591)    磷酸化FMS样酪氨酸激酶3
Phospho-FLT3 (Tyr589 + Tyr591)    磷酸化FMS样酪氨酸激酶3
Phospho-FLT3 (Tyr842)    磷酸化FMS样酪氨酸激酶3
Phospho-FLT3 (Tyr969)    磷酸化FMS样酪氨酸激酶3
Phospho-c-Fos (Ser32)    磷酸化c-fos抗体
Phospho-c-Fos(Thr232)    磷酸化c-fos抗体
Phospho-c-Fos (Thr325)    磷酸化c-fos抗体
FIH1    缺氧诱导因子1α抑制蛋白抗体
F1 operon positive regulatory protein(NT)    肺鼠疫耶尔森氏菌F1荚膜蛋白抗体（N端）
Factor H    补体因子H抗体
FSH beta    促卵泡刺激素抗体
FOX3    神经元核抗原抗体
FAM135B    FAM135B蛋白抗体
Fibulin 1    “衰老关键蛋白”抗体
FSH receptor    促卵泡刺激素受体抗体
FGF12    成纤维细胞生长因子12抗体
FGF14    成纤维细胞生长因子14抗体
FABPB    脑型脂肪酸结合蛋白抗体
FAM96B    FAM96B蛋白抗体
FEZ1    脑胚胎锌指样蛋白1抗体
FAM29A    FAM29蛋白抗体
FASP1    MaFF相关蛋白抗体
Factor VII    凝血因子7抗体
FEM 1B    FEM1B抗体
FGF3    纤维母细胞生长因子3抗体
FGF4    纤维母细胞生长因子4抗体
FRA1    FRA-1蛋白抗体
FTSJ1    精神发育迟滞相关蛋白抗体
FAM62C    延伸突触蛋白3抗体
Fibrillin 2    原纤维蛋白2抗体
FLI1    尤文肉瘤FLI1蛋白抗体
FUT1    岩藻糖转移酶1抗体
FLIP delta + gamma    凋亡调节蛋白δ+γ抗体
实验材料与试剂配制：
1. 仪器与材料：酶标仪（使用前预热30分钟），微量加液器、吸头、蒸馏水或去离子水，滤纸。
Neutrophil collagenase ELISA Kit2. 缓冲液使用：加5ul 的缓冲液于50ul 的样品中，如果样品量不够或者不确定，缓冲液和样品的混合比例不要小于1:10即可。
混匀，静置1小时备用（如果标本是血清或者血浆，此步骤忽略）。
3. 洗液的配制：按1:100的比例配制洗液备用。
操作步骤：
1. 取出试剂盒，室温（20-25℃）放置 30 分钟。 2. 分组：取出 96 孔板，根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数，把剩余的板条继续冷藏处理。分别设标准品组（6 个浓度）、空白孔、待测样品组。
注：为减少实验误差，保证准确性，建议设置复孔。
3. 加样：依照标准品的顺序分别加入 50ul 的标准品溶液于空白微孔中；空白对照孔加入 50ul 的蒸馏水；其余微孔中加入 50ul的待测样本。
4. 加酶标溶液：标准品组、待测样本组各孔中加入 100ul 的酶标溶液（空白对照孔除外）。
5. 温育：酶标板用封板纸密封后，放入湿盒内于 37℃恒温孵育 1 小时。
6. 洗板：用稀释后的洗涤液注满每孔，静置 15-30s，充分清洗酶标板 5 次，用吸水纸彻底拍干。 7. 显色：各孔加入显色剂 A 液 50ul 后，再加入显色剂 B 液 50ul。
8. 终止：25-37℃下避光反应 10-15 分钟，加入 50ul 终止液。
9. 读板：在 450nm 波长读取各孔的 OD 值。