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文献和实验。 图 2.MDA-MB-231乳腺癌细胞的球状体生长。在球状体形成EMC的存在下每孔接种3,000个细胞并在37 °C, 5% CO2条件下培养72小时。此时,加入50ul的完全培养基至每孔中,并将球状体置于37 °C、5% CO2孵育。每隔24小时对球状体进行拍照并使用ImageJ软件对图像进行分析面积的变化。 荧光分析 1.每孔中加入十分之一体积(每100 ul加入10 ul)的刃天青并将培养板返还至37 °C细胞培养箱中。 2.在第1至4小时内每1小时用激发波长530-560 nm/散射
细胞毒检测技术包括补体依赖细胞毒试验、NK细胞介导的细胞毒试验和特异性CTL活性检测,常用的实验技术有后两种。NK细胞(natural killer cell)是在天然免疫系统发挥主要作用的效应细胞,可直接杀伤病毒感染的靶细胞和某些肿瘤细胞。而细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)则是特异免疫系统发挥特异杀伤作用的效应细胞,可特异杀伤病毒感染细胞和肿瘤细胞。本节介绍乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测NK细胞活性、Calcein释放实验检测CTL活性
之Vero细胞,吸除培养液。于每个well中加入2ml 1:3混合的冰醋酸/甲醇固定液,静置10 min后,吸除固定液。重复上述之步骤,风干10分钟。②于每个well中,加入1ml Hoechst 33258 working solution,室温下静置30min。③吸掉Hoechst 33258染液后,以无菌水洗涤3次,风干后加入1滴的mounting solution,并以盖玻片覆盖之。④以100x-400x荧光显微镜观察。打开水银光源10 min后,以UV激发光束(330~380 nm)之滤光
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