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文献和实验Falck-Hillarp 甲醛诱发荧光法 去甲肾上腺素、肾上腺素、多巴胺、5―羟色胺、组胺等生物单胺类物质在组织内的含量甚微,需用高敏感性的技术方法才能在细胞水平显示。生物胺荧光组织化学是在诱发荧光的基础上建立的一种特异性强、敏感性高的技术方法。常用醛类诱发生物胺荧光的方法有Falck-Hillarp甲醛诱发荧光法、乙醛酸诱发生物单胺类荧光以及邻苯二醛诱发组织胺荧光法。 该法主要用于显示儿茶酚胺(catecholamine,CA),如去甲肾上腺素、多巴胺及5―羟色胺
乙醛酸诱发生物单胺荧光法 1.原理 乙醛酸与儿茶酚胺、去甲肾上腺素、多巴胺及5-羟色胺等生物胺的化学反应也是先经闭环,再经脱氢,与儿茶酚胺形成异喹啉类荧光产物或与5-羟色胺形成咔啉类荧光产物。 2.乙醛酸反应液配制(用前新鲜配制) 双蒸水 15.00ml 蔗糖(0.2mol/L) 1.37g 磷酸二氢钾(0.236mol/L) 0.642g 结晶乙醛酸(2%
,一组使用 NaHS 处理,一组则不作处理;然后用荧光马来酰亚胺染料 Alexa Fluor 488 C5 maleimide(下文简称MAL,Invitrogen,A10254)标记半胱氨酸上的硫醇基团,使正常的半胱氨酸通过 -S- 与 MAL 连接,而硫巯基化的半胱氨酸通过二硫键 -S-S- 与 MAL 连接,如下图: 图 1. 文献 Fig. 6G,硫巯基化分析步骤 接下来加入 DTT,硫巯基化蛋白上特有的二硫键就会被解开,导致荧光 MAL 分子脱落,荧光信号减弱。所以,荧光信号发生变化就验证
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