二硫苏糖醇 DTT 3483-12-3 二硫苏糖醇 DTT 3483-12-3 二硫苏糖醇 DTT 3483-12-3
DTT 二硫苏糖醇是一种常用还原剂,又叫二巯基苏糖醇(简称DTT),具有很强的还原性,其还原性很大程度上是由于其氧化状态六元环(含二硫键)的构象稳定性。还原力受pH值的影响,只在pH值大于7的情况下能够发挥还原作用。这是因为只有脱去质子的硫醇盐负离子(-S–)才具有反应活性,硫醇(-SH)则没有;而巯基的pKa一般为~8.3。 性 质
摩尔质量 154.253 g·mol−1
外观 白色固体
熔点 42-43 °C
沸点 125-130 °C (2 mmHg压力下)
在水中的溶解度 可溶
若非注明,所有数据来自25 °C,100 kPa
还原性
DTT是一种很强的
还原剂,其还原性很大程度上是由于其氧化状态六元环(含
二硫键)的构象稳定性。它的
氧化还原电势在pH为7时为-0.33伏。二硫苏糖醇对一个典型的二硫键的还原是由两步连续的
巯基-二硫键
交换反应所组成:

其中,第一步反应所形成的中间态很不稳定,因为DTT上的第二个巯基趋向于与被氧化的硫原子连接,使中间态很快被转化为DTT的环状氧化结构,从而完成对
二硫键的还原。
DTT的还原力受pH值的影响,只在pH值大于7的情况下能够发挥
还原作用。这是因为只有脱去
质子的
硫醇盐负离子(-S–)才具有反应活性,硫醇(-SH)则没有;而巯基的pKa一般为~8.3。应用
DTT的用途之一是作为巯基化DNA的还原剂和去保护剂。巯基化DNA末端硫原子在溶液中趋向于形成
二聚体,特别是在存在氧气的情况下。这种二聚化大大降低了一些
偶联反应实验(如DNA在生物感应器中的固定)的效率;而在DNA溶液中加入DTT,反应一段时间后除去,就可以降低DNA的二聚化。
DTT也常常被用于蛋白质中
二硫键的还原,可用于阻止蛋白质中的
半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。但DTT往往无法还原包埋于
蛋白质结构内部(溶剂不可及)的二硫键,这类二硫键的还原常常需要先将
蛋白质变性(高温加热或加入
变性剂,如6M
盐酸胍、8M 尿素或1% SDS)。反之,根据DTT存在情况下,二硫键还原速度的不同,可以判断其包埋程度的深浅
特点
由于容易被空气氧化,因此DTT的稳定性较差;但冷冻保存或在惰性气体中处理能够延长它的使用寿命。由于质子化的硫的亲核性较低,随着pH值的降低,DTT的有效
还原性也随之降低;而Tris(2-carboxyethyl)phosphine HCl(TCEP盐酸盐)可以作为低pH值条件下DTT的替代品,而且也比DTT更为稳定。
它主要用于研究细胞内各组分,如蛋白质、糖类、脂类、核酸等生物大分子的结构和功能。而对于化学生物学来说,则着重于利用化学合成中的方法来解答生物化学所发现的相关问题。
[1] 生物的分支学科。它是研究生命物质的化学组成、结构及
生命活动过程中各种化学变化的基础生命科学。
生物化学(Biochemistry)这一名词的出现大约在19世纪末、20世纪初,但它的起源可追溯得更远,其早期的历史是生理学和化学的早期历史的一部分。例如18世纪80年代,A.-L.拉瓦锡证明呼吸与燃烧一样是
氧化作用,几乎同时科学家又发现光合作用本质上是植物
呼吸的逆过程。又如1828年F.沃勒首次在实验室中合成了一种有机物──尿素,打破了有机物只能靠生物产生的观点,给“
生机论”以重大打击。1860年L.巴斯德证明发酵是由微生物引起的,但他认为必需有活的酵母才能引起
发酵。1897年
毕希纳兄弟发现酵母的无细胞抽提液可进行发酵,证明没有
活细胞也可进发这样复杂的
生命活动,终于推翻了“生机论”。

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