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文献和实验的)地点:清华大学生物医学馆人物:左)CST 技术工程师李博士;右)清华大学某实验室苏博士(此处为实验掠影)晴朗的一天,按照约定的时间,我们如期而至。这次我们使用的 SimpleChIP® 酶解法试剂盒货号为 9003,专门用于细胞样品,所配套的 protein G 微珠为磁性微珠。实验设计如下:阴性对照(IgG)管 1 个,目的抗体(TCF4)管 1 个,阳性对照(组蛋白 H3)管 1 个因此,此次实验后续有 3 个 ChIP 反应,按照试剂盒的细胞数要求,每一次 ChIP 实验约需要 4×106
%匀浆(例如10mg加入100ulRIPA裂解液),进行匀浆。冰上孵育20min后,13000rpm(4度)离心20min。取上清,分装-80度保存,待测。 2. BCA法蛋白定量 按照BCA蛋白定量试剂盒使用说明操作,测定蛋白浓度。 1、根据样品数量,试剂A:B=50:1配制适量BCA工作液,充分混匀。BCA工作液室温24小时内稳定。 2、完全溶解蛋白标准品,取10μl稀释至100μl,使终浓度为0.5mg/ml。 3、将标准品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20μl加
3. DMEM(高糖 货号#11965,Invitrogen公司) 4. PEN /链球菌(Sigma公司P4333) 5. EDTA的胰蛋白酶(Invitrogen公司15050-065) 6. PBS缓冲液(Invitrogen公司14040-182) 7. Effectene转染
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