HIV-1前病毒PCR试剂盒

HIV-1前病毒PCR试剂盒

HIV-1 Provirus HIV-1

产品及特点

人类免疫缺陷病毒１型（HIV-１）患者血浆中病毒 RNA 水平一直以来是评判抗病 毒治疗效果或预测疾病进展的重要指标。但是，经抗病毒治疗后血浆 HIV-１RNA 已达 到基线水平感染者的血液、精液或淋巴结中仍可以检测到 HIV-１原病毒 DNA 的存在， 构成病毒储藏库，对清除 HIV-１病毒构成严重阻碍。所以在病毒载量已经检测不到的 情况下，HIV-１原病毒 DNA 水平可以作为除 CD4+Ｔ细胞计数和病毒载量之外的另一 标志物。本产品就是针对此需求而建立的一种检测 HIV-１原病毒 DNA 的 PCR 检测方 法，该种方法还可用于 HIV-１病毒储藏库中 HIV-１原病毒 DNA 的检测。本试剂盒具 有下列特点：  

 

1. 根据 HIV-1 LTR 基因设计的针对 HIV-1 原病毒的 PCR 引物，专一性强。

2. 即开即用，用户只需要提供样品模板，操作简单，定量准确快速。

3. 试剂盒有阳性对照，别于区分真假阳性。

4. 本试剂盒足够 50 次 40μL 反应体系的常规 PCR。

5. 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。 

HIV-1前病毒PCR试剂盒规格及成分

编号	成分	规格
试剂一	2×PCR MagicMix 3.0	1 mL（红盖）
试剂二	超纯水	1 mL（本色盖）
试剂三	HIV-1 前病毒 PCR 引物混合液	100 μL（白盖）
试剂四	HIV-1 前病毒 PCR 阳性对照	50 μL（黄盖）
试剂五	天净沙DNA释放剂试用装	50次（试用装）
试剂六	使用手册	1 份

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。

自备试剂 样品 DNA。
 

 

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳 性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 阳性对照的 1 千倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此 作为 PC。另外用水作为 NC。

2. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数寄生虫 DNA 提取 试剂盒兼容。 

二、设置 PCR 反应（40μL 体系）

3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分： 

成分	N+2个 样品管	PCR阴性对照	PCR阳性对照
PCR MagicMix 3.0	各20 μL	20 μL	20 μL
HIV-1 前病毒 PCR 引物混合液	各2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品（包括 PC 和 NC）	各18 μL	-	-
超纯水	-	18 μL	-
PCR 阳性对照 10000 倍稀释液	-	-	18 μL

4. 按下列 PCR 参数进行 PCR 扩增：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR反应 （35个循环）	94℃	30 秒
	53℃	30 秒
	72℃	45 秒
最后延伸	72℃	10 分钟

 

 

三、电泳检测

5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在 扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳 性对照必须有 551bp 大小的条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实 验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。

本试剂盒适用于各种 RNA制品的反转录反应以及随后的PCR扩增。它采用AMV进行反转录反应，能够获得更长的反转录产物。同时，在20ul反转录体系和50ul PCR反应体系中，还可以一次性得到足够量的PCR产物用于后续的克隆实验。本试剂盒中配置的酶均为进口的酶。RT酶采用进口的AMV，所以cDNA更长，基因的信息保留得更完整！反转录过程中特异的RNase抑制剂可有效降低由于外源RNase污染而导致实验失败的风险。本试剂盒使用方便、快捷，可广泛用于cDNA克隆及目的基因检测等分子生物学实验。
注意：
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！