蓝舌病病毒通用RT-PCR试剂盒

禽波氏杆菌PCR试剂盒

Bacteria

产品及特点

波氏杆菌病是由禽波氏杆菌引起的一种细菌性传染病，该病主要造成鸡胚 胎死亡。鸡波氏杆菌也可造成鸭、鹅等其它禽类发病，但成年种鸡基本无异常 现象，个别出现拉绿便、眼流泪、气喘等症状。但种鸡所产种蛋孵化率降低、 死胚增多，死胚多发生在 18 日龄前后，死胚率一般在 30%-40%，有的高达 60%。同时，种蛋孵出的弱雏增多，弱雏率在 5%-20%，雏鸡多在 3-5 日龄发 病，表现为呼吸困难，食欲降低或废绝，精神沉郁，呆立一隅，常急性死亡。 因此快速灵敏检测禽波氏杆菌具有重要意义。本产品就是为此目的根据 PCR 原 理开发的试剂盒，它具有下列特点： 

 

1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。

2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增禽波氏杆菌，与其他微生物没有交 叉反应

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。

5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。 

禽波氏杆菌PCR试剂盒规格及成分

编号	成分	规格
试剂一	PCR MagicMix 3.0	1 mL（红盖）
试剂二	超纯水	1 mL（亮黄色）
试剂三	禽波氏杆菌 PCR 引物混合液	100 μL（白盖）
试剂四	禽波氏杆菌 PCR 阳性对照 （1×10E8 拷贝/μL）	50 μL（黄盖））
试剂五	天净沙核酸释放剂（试用装）	20 次（1 mL，绿盖）
试剂六	使用手册	1 份

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂。  

自备试剂 样品 DNA。
 

 

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取 试剂盒兼容。

2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和一 个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求 的样品起始量）中加 10μL 芽孢杆菌通用 PCR 阳性对照的 10000 倍稀释 液而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放 冰上待用。 

二、设置 PCR 反应（40μL 体系）

3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分： 

成分	样品管 N+2 个	PCR 阴性 对照管	PCR 阳性 对照
PCR Magic Mix 3.0	各20 μL	20 μL	20 μLL
禽波氏杆菌PCR引物混合液	各2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL
PCR 阴性对照（水）		18 μL
PCR 阳性对照（禽波氏杆菌 PCR 阳性对照的 10000 倍稀释液）			18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR反应 （35个循环）	95℃	15 secc
	57℃	15 sec
	72℃	40 sec
最后延伸	72℃	10 min

 

 

三、电泳检测

5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在 扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳 性对照必须有 551bp 大小的条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实 验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。

本试剂盒适用于各种 RNA制品的反转录反应以及随后的PCR扩增。它采用AMV进行反转录反应，能够获得更长的反转录产物。同时，在20ul反转录体系和50ul PCR反应体系中，还可以一次性得到足够量的PCR产物用于后续的克隆实验。本试剂盒中配置的酶均为进口的酶。RT酶采用进口的AMV，所以cDNA更长，基因的信息保留得更完整！反转录过程中特异的RNase抑制剂可有效降低由于外源RNase污染而导致实验失败的风险。本试剂盒使用方便、快捷，可广泛用于cDNA克隆及目的基因检测等分子生物学实验。
注意：
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

 ​​​​​​​