牛赤羽病毒RT-PCR试剂盒

牛赤羽病毒RT-PCR试剂盒

Akabane Disease Virus(AKAV)

产品及特点

牛赤羽病毒(Akabane Virus，AKAV) 会引起赤羽病，又称阿卡班病，是牛、 羊的一种以流产、早产、死胎、胎儿畸形、木乃伊、新生胎儿发生关节弯曲积水 性无脑综合症为特征的病毒性传染病。特征性的表现是妊娠牛异常分娩，多发生 于怀孕 7 个月以上或接近妊娠期满的牛。感染初期胎龄越大的胎儿早产发生的越 多，中期发生难产，即使顺产，新生犊也不能站立。后期多产出无生活能力的犊 牛或瞎眼的犊牛。该病毒会给养殖业带来较大的经济损失，因此灵敏快捷的诊断 产品具有重要的意义。为此本公司开发了本产品，可用于在科研领域快速定量检 测牛赤羽病病毒。它具有下列特点： 

1. 一站式，用于不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。

2. 根据牛赤羽病毒的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。

3. 灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。

4. 使用一管式 RT-PCR 技术，RT 和 PCR 两步在一个试管内完成，不需要中间 转移样品，降低了操作误差和可能的污染。

5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 RT-PCR。

6. 本产品只能用于科研，不能用于临床。

牛赤羽病毒RT-PCR试剂盒规格及成分

编号	成分	规格
试剂一	5×双酶一管式 RT-PCR Buffer	200 μL（黄盖）
试剂二	MMLV-Taq Mix	75 μL（红盖）
试剂三	超纯水	1 mL（蓝盖）
试剂四	牛赤羽病病毒 RT-PCR 引物混合液	100 μL（白盖）
试剂五	牛赤羽病病毒 RT-PCR 阳性对照 （1×10E8 拷贝/μL）	50 μL（黄盖）
试剂六	天净沙核酸释放剂试用装	20 次（1mL，绿盖）
试剂七	使用手册	1 份

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分 分开放置，因为其容易污染其他成分，造成假阳性。 

自备试剂 样品 DNA。

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性 对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 牛赤羽病毒 PCR 阳 性对照的 10000 倍稀释的（稀释后浓度为 1×10E4 拷贝/μL，10μL 相当于 1 万拷贝，可以将 10μL 原液加入到 990μL 自备 TE 溶液中，充分混匀，此 为 100 倍稀释液。再取 10μL 此稀释液加入到 990μL 自备 TE 溶液中，充分 混匀，此为 10000 倍稀释液）再加上一定量的水作为制备的阳性对照（加水 后其总体积跟样品一样，样品体积多少取决于所用试剂盒的要求）。可以用水 作为制备的阴性对照。制备所得成为样品 RNA。

2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提 取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 20 次天净沙核酸释放剂试用装，

二、设置 RT-PCR 反应（20μL 体系）

3. 如果有 N+2 个样品，则标记 N+4 个 PCR 管（额外增加的两个管一个是 RT-PCR 阳性对照，另一个是 RT-PCR 阴性对照）并按照下表在 PCR 管中 加入下列成分： 

成分	样品管 N+2 个	PCR 阴性 对照管	标准曲线 样品管（2-7 管）
5×双酶一管式 RT-PCR Buffer	各4 μL	4 μL	4 μL
牛赤羽病毒 RT-PCR 引物混合液	各2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个制备的 RNA 样品	12.5 μL	不加	不加
超纯水	不加	12.5 μL	不加
牛赤羽病病毒 RT-PCR 阳性对照 的 10000 倍稀释液	不加	不加	12.5 μL
MMLV-Taq Mix	1.5 μL	1.5 μL	1.5 μL

4. 上机进行 RT-PCR，RT-PCR 反应参数为:

过程	温度	时间
逆转录	42℃	60 分钟
预变性	95℃	5 分钟
PCR 反应 （35个循环）	95℃	30 秒
	58℃	30 秒
	72℃	30 秒
延伸	72℃	10 分钟

 

 

5. 琼脂糖电泳检测扩增效果，阳性样品预期得到的扩增产物长度为 720bp。如 果阴性对照有此扩增产物或阳性对照无此扩增产物，则说明实验失败，需要 分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有此扩增产物、阳性对照有此扩增 产物的情况下，才有必要分析样品的实验结果，如果有此扩增产物则为阳性， 如果无则为阴性。 

本试剂盒适用于各种 RNA制品的反转录反应以及随后的PCR扩增。它采用AMV进行反转录反应，能够获得更长的反转录产物。同时，在20ul反转录体系和50ul PCR反应体系中，还可以一次性得到足够量的PCR产物用于后续的克隆实验。本试剂盒中配置的酶均为进口的酶。RT酶采用进口的AMV，所以cDNA更长，基因的信息保留得更完整！反转录过程中特异的RNase抑制剂可有效降低由于外源RNase污染而导致实验失败的风险。本试剂盒使用方便、快捷，可广泛用于cDNA克隆及目的基因检测等分子生物学实验。
注意：
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

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