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- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商:
仕诺达生物
- 库存:
999
- 样本:
组织匀浆
- 标记物:
大豆球蛋白
- 适应物种:
大豆
- 应用:
高校,中科院,研发单位
- 检测方法:
ELISA
- 检测范围:
最低检测浓度小于1.0 ng/mL。
- 规格:
48T/96T
| 规格: | 48T | 产品价格: | ¥1700.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 96T | 产品价格: | ¥2100.0 |
使用说明书
检测原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被大豆球蛋白(Glycinin)抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的大豆球蛋白(Glycinin)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法
1. 样本不能含(NaN3),因为(NaN3)是辣根过氧化物酶(HRP)的抑制剂。
2. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行。
3. 植物萃取液或其它相关样本:请1000 x g离心20分钟,取上清即可检测。
4. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
- 酶标仪(450nm)
- 高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
- 37℃恒温箱
- 试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
- 实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
- 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释5倍,最终结果乘以5才是样本实际浓度。
- 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
- 所有液体组分使用前充分摇匀。
| 名称 | 96孔配置 | 48孔配置 | 备注 |
| 微孔酶标板 | 12孔×8条 | 12孔×4条 | 无 |
| 标准品 | 0.3mL*6管 | 0.3mL*6管 | 无 |
| 样本稀释液 | 6mL | 3mL | 无 |
| 检测抗体-HRP | 10mL | 5mL | 无 |
| 20×洗涤缓冲液 | 25mL | 15mL | 按说明书进行稀释 |
| 底物A | 6mL | 3mL | 无 |
| 底物B | 6mL | 3mL | 无 |
| 终止液 | 6mL | 3mL | 无 |
| 封板膜 | 2张 | 2张 | 无 |
| 说明书 | 1份 | 1份 | 无 |
| 自封袋 | 1个 | 1个 | 无 |
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法
- 手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。
- 自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。
- 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
- 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
- 样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。
- 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
- 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
- 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
- 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。
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