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文献和实验不起作用时,最原始也是最有效方法还是原生质体转化。当经过消化处理的菌体混合液经过Miracloth过滤后,就可以去掉未被消化完全的菌体和杂质,分离得到的“裸露的”原生质体就可以准备进行转化或者电转了。如果没有这一步的分离,未完全消化的菌体由于生长迅速,会严重干扰结果。植物基因组纯化相对比较麻烦一点,市面上有不少试剂盒可供选择,多数纯化基因组DNA的试剂盒采用快速离心方法,其纯化产物大小仅为50kb左右。你可能没有想到,一种改良的Miracloth快速纯化方法是另一种经济有效的选择:通过液氮研磨得到
【原创】Western Blot技术交流第一期 蛋白样品的获得
裂解,获取足够多的蛋白质,使蛋白质充分变性不具有蛋白质活性且较多的基因组等也伴随着提取出来了。RIPA中、弱裂解液及NP-40裂解液、哺乳动物蛋白抽提试剂、组织蛋白抽提试剂则较之温和,其缺点就是样本可能裂解不充分,核、膜蛋白可能提取不完全。具体的选择可以通过下附表进行选择。 细菌样本:细菌蛋白抽提试剂、包涵体蛋白溶解液。 酵母样本:酵母蛋白抽提试剂。 植物样本:植物蛋白抽提试剂。 细胞样本:细胞浆/核/膜蛋白抽提试剂盒。Western Blot实验主要是对蛋白质表达进行相对定量检测,如果有研
RIPA或线粒体分离试剂 蛋白抽提试剂盒的选择蛋白抽提试剂盒的出现弥补了细胞裂解液的应用局限性,特别是针对难提取的样本或者亚细胞器蛋白的提取,例如:针对植物、动物组织/细胞、细菌、酵母等不同样品及细胞核、细胞膜、线粒体、叶绿体、溶酶体等不同亚细胞器的专业提取试剂盒。这类特化试剂盒能够针对目的蛋白的不同来源和不同组织定位进行裂解和提取, 简化实验操作的同时还能提高蛋白提取的得率。以 Sigma 公司的 CelLytic?系列蛋白提取试剂盒为例:一方面,该系列试剂盒有非变性的裂解
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