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文献和实验一、ELISA试剂盒的组成 完整的ELISA试剂盒包含以下各组分: (1)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂); (2)酶标记的抗原或抗体(结合物); (3)酶的底物; (4) 阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),参考标准品和控制血清(定量测定中); (5)结合物及标本的稀释液; (6)洗涤液,在板式ELISA中,常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水; (7)酶反应终止
1. 催化特点 ① 高效性 ② 专一性 键专一、基团专一、绝对或几乎绝对专一 ③ 可调节性 酶浓度调节、激素调节、共价修饰调节、限制性蛋白酶的水解作用与酶活调节、抑制剂的调节、反馈调节、金属离子和其他小分子化合物的调节。 2. 影响酶活因素 ①. 酶活测定方式 测定酶活,必须了解酶催化反应总的反应式,而且分析程序必须能够测定底物的消失或产物的生产。还需考虑辅助因子、酶的最适pH值和最适温度。 ②. 酶联测定法 过氧化物酶和它的共底物或辅酶必须过量,使酶联测定不属于限速步骤。 ③ 酶
。非均相 EIA 需先进行游离的和结合的标记物的分离。如前所述,固相载体可用作一种分离手段。这种固相酶免疫测定方法在 1971 年最初建立时称为酶联免疫吸附剂测定(enzymelinked immunosorbent assay),简称 ELISA,在国内有译作酶联免疫吸附试验的,虽然含义不完全确切,但已习用。
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