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文献和实验液,常用的HRP反应终止液为硫酸,其浓度按加量及比色液的最终体积而异,在板式ELISA中一般采用2mol/L。 二、ELISA试剂盒的包被方式 将抗原或抗体固定在过程称为包被(coating)。换言之,包被即是抗原或抗体结合到固相载体表面的过程。蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的,靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用于。这种物理吸附是非特异性的,受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响。载体对不同蛋白质的吸附能力是不相同的,大分子蛋白质较小
, ON for 48 hours. filter on 0.22 µm filter. run ELISA to establish the Ig concentration SOLUTIONS ammonium sulphate, saturated, pH 6.8, store at RT PBS ѓ [ p u r
上述混合液加0.2778固体硫酸钱,40度搅拌30分钟,以4000-6000r/min离心巧一20分钟,将沉淀溶于少量YBS,透析,测蛋白含量,冻存。(3)硫酸铵沉淀法按常规方法将腹水分别经50%,33%饱和度硫酸铵沉淀。(4)亲合层析取提取的样品,用0.01lmol/ L Na2HPO4 (pH7.4)透析,洗脱使样品中IgG结合于层析柱上,再用0. lmol/ L柠檬酸(pH4.0)洗脱,收集洗脱液即获纯化IgG。(5)SDS—PAGE电泳鉴定抗体纯度(6)间接ELISA法测定抗体效价用sIgA
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