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文献和实验饥饿的 HeLa 和 NIH 3T3 癌细胞系获得的裂解物中的磷酸化蛋白特异性。图示:从复杂生物样品中富集高纯度磷蛋白。用 theThermo Scientific Pierce 磷酸化蛋白富集试剂盒进行 Weste blot 分析,根据试剂盒说明书制备细胞裂解液,富集磷酸化蛋白。利用识别生长因子信号传导相关关键调控蛋白的磷酸化特异性抗体实现蛋白检测。细胞色素 C (pI 9.6) 和 p15Ink4b (pI 5.5) 作为非磷酸化蛋白非特异性结合的阴性对照。FT = 流穿馏分,W = 合并洗脱馏分,E
这既与其较高的灵敏性有关亦与其较低的特异性有关。为证实此点我们作了进一步研究,结果发现TUNEL凋亡检出率与Annexin V/PI中凋亡+死亡检出率无显著差异,相关分析亦提示TUNEL凋亡检出率实际更能反映凋亡+死亡检出率。 1992年Fadok 报道在细胞凋亡早期位于细胞膜内侧的磷酯酰丝氨酸(PS)迁移至细胞外侧[4] 。1995年Vermes利用对PS有高度亲合力的磷脂结合蛋白Annexin V检测凋亡细胞。由于坏死细胞PS亦暴露于外表使Annexin V结合
灵敏性。但该法最大缺点是坏死细胞亦呈现TUNEL反应阳性,使其特异性降低[3] 。本研究TUNEL凋亡检出率为50.17%,显著高于其它二法。我们认为这既与其较高的灵敏性有关亦与其较低的特异性有关。为证实此点我们作了进一步研究,结果发现TUNEL凋亡检出率与Annexin V/PI中凋亡+死亡检出率无显著差异,相关分析亦提示TUNEL凋亡检出率实际更能反映凋亡+死亡检出率。 1992年Fadok 报道在细胞凋亡早期位于细胞膜内侧的磷酯酰丝氨酸(PS)迁移至细胞外侧[4] 。1995年Vermes利用
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