- ￥1700
- 仕诺达
- 阴性对照OD值+0.15，样本OD值大于阈值，判定为阳性，反之，为阴性。
- SND--P014
- 安徽
- 2025年12月11日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商：
仕诺达生物
- 库存：
999
- 样本：
血清，血浆，组织匀浆
- 标记物：
猪流行性腹泻病毒
- 适应物种：
猪
- 应用：
高校，中科院，研发中心
- 检测方法：
双抗体夹心法酶联免疫吸附试验
- 检测范围：
阴性对照OD值+0.15，样本OD值大于阈值，判定为阳性，反之，为阴性。
- 规格：
48T/96T
使用说明书
- 本试剂盒用于体外定性检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中猪流行性腹泻病毒（PEDV）。
- 有效期：6个月
- 保存条件：2-8℃
- 本试剂盒仅供科研使用，不得用于临床诊断
实验原理
试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被猪流行性腹泻病毒（PEDV）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、阴性和阳性对照、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的猪流行性腹泻病毒（PEDV）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），判定阴阳性。
样本处理及要求
1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
4. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
需要而未提供的试剂和器材
- 酶标仪（450nm）
- 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
- 37℃恒温箱
- 蒸馏水或去离子水
试剂盒组成
| 名称 | 96孔配置 | 48孔配置 | 备注 |
| 微孔酶标板 | 96孔 | 48孔 | 无 |
| 阴性对照 | 0.3mL | 0.3mL | 无 |
| 阳性对照 | 0.3mL | 0.3mL | 无 |
| 样本稀释液 | 6mL | 3mL | 无 |
| 检测抗体-HRP | 10mL | 5mL | 无 |
| 20×洗涤缓冲液 | 25mL | 15mL | 按说明书进行稀释 |
| 底物A | 6mL | 3mL | 无 |
| 底物B | 6mL | 3mL | 无 |
| 终止液 | 6mL | 3mL | 无 |
| 封板膜 | 2张 | 2张 | 无 |
| 说明书 | 1份 | 1份 | 无 |
| 自封袋 | 1个 | 1个 | 无 |
注意事项
- 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
- 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
- 消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。
- 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。
- 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
- 在储存和温育时避免强光直接照射。
- 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
- 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
- 不能使用过期产品。
- 如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。
试剂准备
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。
20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。
操作步骤
- 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
- 设置阴性对照孔、阳性对照孔和样本孔，阴性、阳新对照孔各加50μL对照品；
- 样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
- 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
- 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
- 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
- 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
实验结果计算
1. 阴性对照OD值：小于0.2。
2. 阳性对照OD值：大于0.8。
3、阳性判断（Cut-Off值）：阴性对照OD值+0.15，样本OD值大于阈值，判定为阳性，反之，为阴性。
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文献和实验猪流行性腹泻病毒（PEDV ）抗体 酶联免疫 分析（ ELISA ） 试剂 盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于检测猪血清，血浆及相关液体样本中流行性腹泻病毒（PEDV）抗体水平，感染猪的血液学诊断。 实验原理 ： 本试剂盒 采 用双 抗原 夹心 酶联免疫 法 （ELISA ） 测定 标本 中 猪流行性腹泻病毒（PEDV ）抗体 。用纯化的 猪流行性腹泻病毒（PEDV ） 抗原 包被微孔板，制成固相
H2 SO4 )：浓硫酸22.2ml、蒸馏水177.8ml。 7. 猪流行性腹泻(PED)抗原：PEDV猪胎肠原代细胞培养物，反复冻融，65℃ 30min灭活。最后以3 000 r/min离心30min，取上清分装，-20℃保存备用。抗原的蛋白浓度为300μg/ml。 8. 酶标兔抗猪抗体结合物：酶结合物效价为1∶10 000。 9. 被检猪血清：采自疫区猪和病猪。PEDV免疫猪血清及健猪血清分别用于阳性、阴性对照。 实验
猪口蹄疫病毒（FMDV ） 酶联免疫 分析（ ELISA ） 试剂 盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定猪血清，血浆及相关液体样本中 猪口蹄疫病毒（FMDV） 含量。 实验原理 ： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定 标本 中 猪口蹄疫病毒（FMDV ） 水平。用纯化的 猪口蹄疫病毒（FMDV ） 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 口蹄疫病毒（FMDV ） ，再与HRP 标记
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