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人载脂蛋白B(ApoB)试剂盒
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西安百萤生物科技有限公司
Mabtech的经过仔细验证的ELISAPRO试剂盒提供了所有必需的试剂,以方便,可靠,特异的方式方便地定量测定血清,血浆和细胞培养上清液中的分析物。
ELISAPRO试剂盒随附有预先涂有单克隆抗体(mAb)。样品中的分析物被包被的mAb捕获,并被生物素化的检测mAb和链霉亲和素-HRP(SA-HRP)检测。注:TMB底物的添加将导致底物出现颜色。用硫酸终止反应,并且可以使用ELISA板酶标仪定量光密度。通过与平行分析的ELISA标准品的系列稀释液比较来确定分析物的浓度。
ELISAPRO试剂盒包括Apo ELISA缓冲液,一种可防止假阳性信号的缓冲液。缓冲液可阻止嗜异性抗体交联测定抗体。嗜异性抗体通常存在于人血清/血浆中,也可以存在于其他物种中。缓冲液已使用来自健康人类献血者的血清/血浆样品进行了验证。
Stop溶液0.18 M H.2.S.O.4(<1%)对眼睛和皮肤有刺激性,应小心处理。由于不知道暴露的影响,因此应仔细处理该标准。溶液中的缓冲液和试剂含有防腐剂Kathon CG(0.002%),这是一种潜在的过敏原,可能通过皮肤接触引起过敏。人和动物样品应被视为潜在危险的生物材料。所有材料应按照当地法规进行处理。有关更多信息,请查阅我们网站上的《安全数据表》。
在开始测定之前,让板和测定试剂达到室温(TMB底物除外,最好使用冷底物)。计划板布局,使其一式两份,包括标准曲线,样品和测定背景对照。每孔的体积不应超过100μl。
样品实验方案
储备溶液配制
将50 ml洗涤缓冲液浓缩液添加到950 ml蒸馏水或去离子水中(足以完成1个板的所有洗涤步骤)。如果在20倍浓缩物中形成了晶体,则将其升至室温并轻轻混合以溶解。
用蒸馏水或去离子水将Apo ELISA缓冲液浓缩液稀释5倍,以制备所需体积的Apo ELISA缓冲液。对于每个板,将30 ml Apo ELISA缓冲液浓缩液添加到120 ml水中。
所有样品均应在Apo ELISA缓冲液中稀释至少2倍。除去可见的沉淀物并在聚丙烯管/板中稀释,应在样品之前添加缓冲液。高度溶血和高血脂的样品可能会导致定量结果不准确。为防止不同的LDL粒径干扰,所有血清/血浆来源的样品均应在Triton X-100缓冲液中稀释2倍,然后涡旋振荡5秒钟。Triton X稀释对于细胞系产生的样品不是必需的,并且不会干扰其他载脂蛋白的分析。避免冻融循环,因为它会导致信号降低。
根据对空腹健康受试者的反复分析,我们建议稀释系数为5000X。精确的移液非常重要,在稀释步骤之间更换吸头,并使用新鲜制成的稀释液。试剂的数量足以重复使用。
apoB标准品是由50%甘油稳定的纯化LDL。浓度为125μg/ ml。无需分装标准液,因为高含量的甘油可使标准液保持液态。储存在-20°C。
如图所示,稀释标准储备溶液以创建标准曲线。试剂的数量足以重复使用。最后一个样品瓶用作测定背景对照,即应省略标准液。在使用30分钟内准备标准曲线。
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