- ￥50
- 泽叶生物
- ZY-93015
- 中国
- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
SDS-PAGE loading buffer, 4×(with β-Mercaptoethanol)
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海泽叶生物科技有限公司
- 保存条件：
Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles
- 规格：
盒
| 5ml | 50.00元 |
| 英文名称 | SDS-PAGE loading buffer, 4×(with β-Mercaptoethanol) |
| 中文名称 | 4×蛋白上样缓冲液（含巯基还原剂） |
| 别 名 | SDS-PAGE loading buffer,4×(with β-ME); |
| 保存条件 | Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. |
| 产品介绍 | 本产品适用于SDS-PAGE(SDS变性聚丙酰胺凝胶电泳)时作蛋白质上样用。其主要成份为SDS，β-巯基乙醇，溴酚蓝，缓冲盐溶液等。 SDS可与蛋白质结合使蛋白质－SDS复合物上带有大量的负电荷，这时蛋白质本身的电荷完全被SDS掩盖，消除了各种蛋白质本身电荷的差异，SDS还可以断开分子内和分子间的氢键，破坏蛋白质分子的二级和三级结构；β-巯基乙醇可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键，破坏蛋白质的四级结构，消除了蛋白结构之间的差异。最终无电荷及结构上差异的蛋白（亚单位），电泳速度只是与其分子量大小有关；溴酚蓝用作电泳时的指示剂，可大概指示电泳结束的时间。 使用介绍： 1. 按每3微升蛋白样品加入1微升蛋白上样缓冲液的比例，混合蛋白样品和蛋白上样缓冲液(4X)。 2. 混匀后，100℃水浴加热5-10分钟，使蛋白充分变性。 3. 冷却到室温后，10000-14000rpm离心2-5分钟，取上清直接上样电泳即可。 4. 通常电泳时染料到达胶的底端附近（0.5-1cm）即可停止电泳。 |
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文献和实验-PAGE 电泳分析检测结果。这种方法得到的目的蛋白 N是在细胞内与蛋白 M 天然结合的，符合体内实际情况，得到的结果可信度高。这种方法常用于测定两种目标蛋白是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。 步骤 用预冷的 PBS 溶液洗涤贴壁细胞两次（对于悬浮细胞则用台式离心机以 800-1000 rpm 转速通过离心洗涤）。 加入预冷的 RIPA 液（含蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂），RIPA 液的用量：按照 0.5 mL 每 5×106 细胞计算。 注：悬浮细胞，收集
入 DMSO 或 2-巯基乙醇，混合后加入 L 连接反应液 (含重组质粒)，温和混匀，置冰上 30 min；2. 42 ℃ 水浴 45 秒，然后迅速放回冰中 1～2 min；3. 加入 2 mL LB 培养液，37 ℃ 轻摇荡培养 1 h；4. 4,000×g 离心 10 秒钟，弃上清，用 LB 培养液重悬菌体；5. 将菌液铺于含有适当抗生素的 LB 琼脂培养板上，涂匀，室温放置 20～30 min，倒置于 37 ℃ 孵箱中培养 12～16 h。（三）转化细胞的筛选【实验原理】1、 蓝白筛选:以 TA
它的蛋白溶液可以冻存)与Zwittergent 等双性离子去垢剂； ③还原剂：DTT、DTE、TBP、Tris-base 等；④蛋白酶抑制剂及核酸酶：EDTA、PMSF、蛋白酶抑制剂混合物(Protease inhibitor cocktails)等，如为了去除缓冲液中存在的痕量重金属离子，可在其中加入0.1～5mmol/LEDTA，同时使金属蛋白酶失活。 三、 仪器和试剂 仪器 离心机、移液器、研钵、离心管、冰箱。 试剂 1. 20mL 样品提取缓冲液：2.5mL
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