- ￥100 - 180
- 泽叶生物
- ZY-930001
- 中国
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
SDS-PAGE loading buffer,5×(with β-Mercaptoethanol) 中
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海泽叶生物科技有限公司
- 保存条件：
Store at -20 °C for one year.
- 规格：
盒
| 5ml | 100.00元 |
| 10ml | 180.00元 |
| 英文名称 | SDS-PAGE loading buffer,5×(with β-Mercaptoethanol) |
| 中文名称 | 5×蛋白上样缓冲液（含巯基还原剂） |
| 别 名 | 5×SDS-PAGE loading buffer(with β-Mercaptoethanol); 5×SDS-PAGE loading buffer with β-Mercaptoethanol; SDS-PAGE Sample Loading Buffer，5×(with β-Mercaptoethanol); |
| 保存条件 | Store at -20 °C for one year. |
| 产品介绍 | 简介： 本产品适用于SDS-PAGE(SDS变性聚丙烯酰凝胶电泳)时作蛋白质上样用。其主要成份为SDS，β-巯基乙醇，溴酚蓝，缓冲盐溶液等。 SDS可与蛋白质结合使蛋白质－SDS复合物上带有大量的负电荷，这时蛋白质本身的电荷完全被SDS掩盖，消除了各种蛋白质本身电荷的差异，SDS还可以断开分子内和分子间的氢键，破坏蛋白质分子的二级和三级结构；β-巯基乙醇可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键，破坏蛋白质的四级结构，消除了蛋白结构之间的差异。最终无电荷及结构上差异的蛋白（亚单位），电泳速度只是与其分子量大小有关；溴酚蓝用作电泳时的指示剂，可大概指示电泳结束的时间。 使用介绍： 1. 按每4微升蛋白样品加入1微升蛋白上样缓冲液的比例，混合蛋白样品和蛋白上样缓冲液(5X)。 2. 混匀后，100℃水浴加热3-5分钟，使蛋白充分变性。 3. 冷却到室温后，10000-14000rpm离心2-5分钟，取上清直接上样电泳即可。 4. 通常电泳时染料到达胶的底端附近（0.5-1cm）即可停止电泳。 注意事项： 1. 上样缓冲液分为还原型和非还原型两种，还原型上样缓冲液中含一定量的DTT或巯基乙醇，有轻微刺激性气味，较易区分。 2. 还原型上样缓冲液中的巯基可使蛋白分子的链内二硫键和链间二硫键断裂，使通过二硫键连接的各亚单位彼此分离，在电泳凝胶上显现多个蛋白条带，选购和使用时请务必注明，仔细区分。 3. 本试剂因含β-巯基乙醇，有一定的毒性，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 4. 蛋白上样缓冲液含有溴酚蓝指示剂，PH值受保存温度影响，在低温冻存状态下，溶液可能会呈现深棕色，不影响产品使用。 |
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文献和实验-PAGE 电泳分析检测结果。这种方法得到的目的蛋白 N是在细胞内与蛋白 M 天然结合的，符合体内实际情况，得到的结果可信度高。这种方法常用于测定两种目标蛋白是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。 步骤 用预冷的 PBS 溶液洗涤贴壁细胞两次（对于悬浮细胞则用台式离心机以 800-1000 rpm 转速通过离心洗涤）。 加入预冷的 RIPA 液（含蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂），RIPA 液的用量：按照 0.5 mL 每 5×106 细胞计算。 注：悬浮细胞，收集
入 DMSO 或 2-巯基乙醇，混合后加入 L 连接反应液 (含重组质粒)，温和混匀，置冰上 30 min；2. 42 ℃ 水浴 45 秒，然后迅速放回冰中 1～2 min；3. 加入 2 mL LB 培养液，37 ℃ 轻摇荡培养 1 h；4. 4,000×g 离心 10 秒钟，弃上清，用 LB 培养液重悬菌体；5. 将菌液铺于含有适当抗生素的 LB 琼脂培养板上，涂匀，室温放置 20～30 min，倒置于 37 ℃ 孵箱中培养 12～16 h。（三）转化细胞的筛选【实验原理】1、 蓝白筛选:以 TA
它的蛋白溶液可以冻存)与Zwittergent 等双性离子去垢剂； ③还原剂：DTT、DTE、TBP、Tris-base 等；④蛋白酶抑制剂及核酸酶：EDTA、PMSF、蛋白酶抑制剂混合物(Protease inhibitor cocktails)等，如为了去除缓冲液中存在的痕量重金属离子，可在其中加入0.1～5mmol/LEDTA，同时使金属蛋白酶失活。 三、 仪器和试剂 仪器 离心机、移液器、研钵、离心管、冰箱。 试剂 1. 20mL 样品提取缓冲液：2.5mL
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