NE-PER核蛋白-胞浆蛋白分离试剂

Thermo Scientific NE-PER核蛋白-胞浆蛋白抽提试剂盒提供了高效的核蛋白抽提方法，用户只需拥有台式微量离心机、离心管和移液器，进行简单的分步式细胞裂解及核蛋白与胞浆蛋白离心分离即可。NE-PER 试剂盒能够高效地将胞浆蛋白与核蛋白溶解和分离为不同组分，交叉污染以及基因组 DNA/mRNA 的干扰均降到了最低。一旦经过脱盐或稀释，分离后的蛋白即可用于免疫分析和蛋白相互作用实验，如迁移率分析(EMSA)、免疫共沉淀 (Co-IP) 和拉下实验。

• 快速-2小时内获得胞核与胞浆内的可溶性蛋白组分，交叉污染以及基因组DNA/mRNA的干扰均降到了最低
• 可靠-超过“万篇”的文献出镜率，广受科研工作者喜爱
• 通用-培养细胞或者组织（新鲜样本）
• 高活性-获得样本适合于多种下游应用，包括免疫印迹、凝胶迁移分析(EMSA)、报告基因分析以及酶活性分析
• 可扩展—两种规格试剂盒，满足从细胞和组织中抽提样本的应用需求
• 方便—操作简单，无需超速梯度离心

图1.获取的细胞核和细胞质组分几乎无交叉污染。采用NE-PER细胞核和细胞质抽提试剂与其他品牌的细胞核抽提试剂盒提取 HeLa 细胞。使用常用的核蛋白、胞质蛋白和膜蛋白标志物的抗体，采用NE-PER 试剂盒所得的细胞核组分几乎无胞质或膜蛋白污染。

              
图2. 抽提各种组织中蛋白的Western Blot结果。使用NE-PER核蛋白和胞浆蛋白抽提试剂，从不同组织中富集和分离核蛋白和胞浆蛋白，并分别进行Western Blot检测。

分离胞核和制备核蛋白抽提物的方法很多，但大多数制备核蛋白抽提物的制备方法都很耗时，并需要机械匀浆、冻融循环、反复离心或透析，而这些都可能影响核蛋白的完整性。NE-PER 核蛋白-胞浆蛋白抽提试剂盒使用了基于试剂的分离方案，能够分步裂解细胞并从胞浆中分离出完整的细胞核，然后再从基因组 DNA 与 mRNA 中抽提核蛋白。这一温和的过程可在两小时之内完成，且使用培养细胞时仅需标准的桌台式离心机即可。此外，用户还可以从细胞培养物或组织样本中分离得到具有活性的核蛋白与胞浆蛋白。

本试剂盒能够从两百万个细胞中提出 200 至 500µg 胞浆蛋白和 100 至 200µg 的核蛋白（浓度为 1mg/mL）。一般情况下，胞浆蛋白与核蛋白之间的交叉污染在 10% 左右。本方法分离得到的主要是细胞核中的可溶蛋白，而非与染色质结合的蛋白或核膜整联蛋白。可通过调整核抽提试剂（NER）的体积来改变胞核抽提物的蛋白浓度，而不会对抽提效率造成显著影响。从细胞中专一地抽提核蛋白是许多基因调控研究的关键，然而现有的许多分离细胞核、制备核蛋白抽提物的方法都十分耗时，且需要进行机械匀浆、冻融循环、重复离心或透析等操作，对许多脆弱的核蛋白的完整性造成影响。NE-PER 试剂盒能够克服这些问题，通过 EMSA 及其他分析技术为用户提供高质量的浓缩核蛋白抽提物。

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