核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒

细胞蛋白提取
1. 提取液准备：
每200 μl蛋白提取液A中加入1 μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
每200 μl蛋白提取液B中加入1 μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取5-10×106个细胞，在4℃，1000×g条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
3. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 每20 μl体积细胞沉淀（约20 mg，2×106个细胞）中加入200-300 μl冷的提取液 A，高速涡旋振荡15秒或吹打混匀，置2-8℃条件振荡15-30分钟。
5. 然后在4℃，1000×g条件下离心10分钟。
6. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白，请置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
7. 沉淀用PBS洗涤一次，在4℃，1000×g条件下离心5分钟，弃上清。
8. 在沉淀中加入200 μl冷的提取液B，高速涡旋振荡5秒。
9. 置2-8℃条件振荡30分钟，至沉淀明显减少甚至无明显沉淀。
10. 在4℃，14000×g条件下离心10分钟。
11. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到核蛋白。
12. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

组织蛋白提取
1. 提取液制备：
每200 μl蛋白提取液A中加入1 μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
每200 μl蛋白提取液B中加入1 μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取适量组织样本，用手术剪刀尽可能剪碎，加冷PBS，用组织匀浆机/匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体，冰上静置5分钟，小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。
3. 在4℃，500×g条件下离心5分钟，弃上清。
4. 每20 mg组织（20-30 μl细胞沉淀体积）中加入200 μl冷的提取液 A，高速涡旋振荡15秒或吹打混匀，置2-8℃条件振荡20-30分钟。
5. 然后在4℃，1000×g条件下离心10分钟。
6. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白，请置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
7. 沉淀用PBS洗涤一次，在4℃，1000×g条件下离心5分钟，弃上清。
8. 在沉淀中加入100-200 μl冷的提取液B，高速涡旋振荡5秒。
9. 置2-8℃条件振荡30-40分钟，至沉淀明显减少甚至无明显沉淀。
10. 在4℃，12000×g条件下离心10分钟。
11. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到核蛋白。
12. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。