TMB One Solution (HRP-based EL

ELISA 实验操作要点

或抗原成份。有些标本可直接进行测定（如血清、尿液），有些则需经预处理（如粪便和某些分泌物）。 大部分ELISA 检测以血清标本为主。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外，其他成份均同等于血清。制备血浆标本需借助于抗凝剂，而血清标本只要待血清自然凝固、血块收缩后即可取得。血清标本可按常规方法采集，应注意避免溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以 HRP 为标记的 ELISA 测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色。 血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性 HRP，也会

别小瞧了ELISA

室所用洗板机3次洗板即可达到要求。 六、显色 在目前的以HRP作为标记酶的商品ELISA试剂盒中，如以TMB为底物，则提供的底物为A和B两瓶应用液；如以OPD为底物，则试剂盒提供OPD片剂或 粉剂，临用前配制。一般商品试剂盒显色反应条件为37 ℃或室温反应15～30分钟。从理论上说，37 ℃30分钟才可以使HRP的底物催化反应完全，尽管在最初的10分钟内，绝大部份催化反应即可完成。因此，为使弱阳性样本孔能有充分的显色，建议在37 ℃下反应25～30分钟后，终止反应比色

竞争法ELISA操作步骤

气泡。加样时间宜控制在10分钟内。 洗涤：甩尽孔内液体，每孔加洗涤液350 μL，浸泡1-2分钟，吸去或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。重复此洗板步骤3次。提示：此处与其他洗板步骤都可用洗板机。每一步洗涤充分是实验的根本。 HRP酶结合物：每孔加酶结合物工作液100 μL，混匀，加上覆膜，37℃孵育30分钟。 洗涤：弃去孔内液体，洗板5次，方法同步骤2。 底物：每孔加底物溶液(TMB)90 μL，混匀，加上覆膜，37℃避光孵育15分钟左右。提示：根据实际显色情况酌情缩短