- ￥125
- 信裕生物
- XY125C1
- 中国
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商：
上海信裕生物科技有限公司
- 库存：
大量
- 英文名：
胰蛋白酶消化液（0.25%Trypsin-EDTA,1X）
- 规格：
125ml
产品介绍
胰蛋白酶消化液，含有胰蛋白酶（0.25%）、 EDTA 和酚红，不含有钙、镁离子。该产品 经过严格的过滤除菌，适用于组织和单层细胞的分离。
操作步骤
1. 吸取培养基，用无菌的 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以除去残余的血清。
2. 加入适量的胰蛋白酶消化液，略盖过细胞即可。根据细胞的特性可以增加或减少胰酶用量，室温放置 30 秒至 2 分钟。（不同的细胞消化时间有所不同）
3. 显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的 变化呈白茫状；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来。
4. 此时吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于 后续实验。如果发现消化不足，则加入胰酶细胞消化液重新消化。 保存条件
-20℃保存，冰袋运输，至少 1 年有效；
注意事项
1. 应根据不同组织和细胞的性质确定最佳消化时间和胰蛋白酶的用量，消化时间不宜过
长，以免影响细胞的活力。
2. 解冻后宜分装使用，避免反复冻融。
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文献和实验的 PBS)离心洗涤 1~2 次； 若悬液中有明显的沉淀块，需用 200~300 目的滤网过滤后再用细胞染色 buffer(或含 1%BSA 的 PBS)洗涤 1~2 次； 用细胞染色 buffer(或含 1%BSA 的 PBS)调整浓度至 1x107/mL 备用。 六、贴壁细胞的制备 吸除培养基上清液，用含无钙、镁离子的PBS漂洗一次； 以 25 mL 培养基为例，加入 1 mL 消化液（0.1%胰蛋白酶），置室温（25℃）或 37℃ 消化 2~5 min；或者加入 1 mL 的 EDTA
3）， 10% 胎牛血清。传代：吸去培养液。 用 0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA 洗一次，以去除血清（血清会抑制胰酶的活性）。加 2 - 3 毫升 Trypsin-EDTA，放在 37℃ 培养箱内约 5 分钟，直到细胞全部脱落。加 6 - 8 毫升培养液，用移液器把细胞吹散。加适量的细胞到新的培养器皿中。（以 1：4 到 1：8 为宜，传代期间培养液更换 1 - 2 次）冻存：95% 培养液 + 5% DMSO 冻存于液氮。2. 293 细胞293 细胞比较容易转染
。其所显示的染色体带纹清晰，普通显微镜下可以分辨，标本可长期保存，因此被广泛应用。实验步骤（以下以贴壁培养细胞为例）一、实验准备1）细胞完全培养基：根据细胞类型和实际需要确定2）细胞消化液：0.25% Trypsin-EDTA3）磷酸缓冲液（PBS）：pH7.44）秋水仙素（或者秋水仙胺）溶液：20 μg/mL5）低渗液：0.075 M KCl 溶液6）固定液（新鲜配制）：甲醇：冰醋酸 = 3：17）Giemsa 染色液：先配置 1% Giemsa 原液（以甘油，甲醇配制），再以 PBS 稀释 10 倍
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