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5×蛋白上样缓冲液(含β-ME
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5×Protein Loading Buffer(With β-ME)
一年
上海信裕生物科技有限公司
-20 °C
5×1ml/10ml
中文名:5×蛋白上样缓冲液(含β-ME)
英文名:5×Protein Loading Buffer(With β-ME)
CAS:N/A
级别:N/A
分子量:N/A
分子式:N/A
纯度:N/A
储存条件:-20 °C
产品说明:
5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液 (还原)是以溴酚蓝为染料,5倍浓缩的SDS-PAGE凝胶电泳上样缓冲液,应用于还原型SDS-PAGE的蛋白样品制备和上样。
5×蛋白上样缓冲液分别含有DTT和β-ME,可使蛋白质分子的链内二硫键和链间二硫键断裂,通过二硫键连接的各蛋白亚单位彼此分离,经考马斯亮蓝染色以后在电泳凝胶上显现清晰蛋白条带。
β-巯基乙醇和DTT都是还原剂,防止蛋白质被氧化,β-巯基乙醇常用浓度为5-20MMOL/L,DTT为0.5-1MMOL/L。因为β-巯基乙醇加入缓冲液后24小时易被氧化,其后加速蛋白质的失活,而DTT氧化后形成稳定的分子内二硫健,并不危及蛋白的巯基,所以在蛋白制备中常用β-巯基乙醇,而长期储存用DTT。
含DTT和β-ME冻存的上样液电泳使用区别不明显,除了β-ME气味较大之外。
使用方法:
1.将5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液 (还原)与蛋白样品按照1:4的比例混匀。
(加样前在室温或37-40℃数分钟解冻后轻轻摇匀,以确保溶液混合均匀。)
2.将蛋白样品置于95℃中加热3-5分钟。
3.待蛋白样品充分变性后冷却至室温,以小于3000 rpm的条件离心30秒。
4.离心后,以微量进样器取适量上清,直接加入SDS-PAGE凝胶加样孔内。
5.进行常规电泳,通常染料到达距离凝胶底端0.5-1 cm处即可停止电泳。
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