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文献和实验0.9,而CCD-扫描仪的数值孔径为0.2~0.5。有其他类型的扫描仪不用目镜而是使用积分球面镜来采集释放的部分光源,但是部分光线经过多次球面反射而衰减。还有一些无散光收集装置,仅仅是将探测器放在样品的某一区域的上方,光线采集的效率受限于样品被照明处的范围及探测器的视角,例如,一个直径为25mm的探测器放在激发点上方100mm处,其实际的有效数值孔径为0.12。图2显示目镜的不同数值孔径与光采集效率的关系。 图2 目镜的不同数值孔径与光采集效率的关系 空间定位 是指对样品上的某一小区域上的荧
。 后来Giddings和Snyder等人在Van Deemter方程(H=A+B/u+Cu,后称气相色谱速率方程)的基础上,根据液体与气体的性质差异,提出了液相色谱速率方程(即Giddings方程): H=2λdp++\s\up 5(2p+\s\up 5(2p+\s\up 5(2f 2.影响柱效的因素 1)涡流扩散(eddy diffusion)。由于色谱柱内填充剂的几何结构不同,分子在色谱柱中的流速不同而引起的峰展宽。涡流扩散项A=2λdp,dp为填料直径,λ为填充
)。由于色谱柱内填充剂的几何结构不同,分子在色谱柱中的流速不同而引起的峰展宽。涡流扩散项A=2λdp,dp为填料直径,λ为填充不规则因子,填充越不均匀λ越大。HPLC常用填料粒度一般为3~10μm,最好3~5μm,粒度分布RSD≤5%。但粒度太小难于填充均匀(λ大),且会使柱压过高。大而均匀(球形或近球形)的颗粒容易填充规则均匀,λ越小。总的说来,应采用细而均匀的载体,这样有助于提高柱效。毛细管无填料,A=0。 2)分子扩散(molecular diffusion)。又称纵向扩散。由于进样后溶质分子在柱
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