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文献和实验,都要用新的,用双蒸馏水洗净,灭菌。使用前打开包装,用镊子夹取,不要直接用手去拿,以防手上的杂酶污染。 2.DNA样品和限制性内切酶的用量都极少,必须严格注意吸样量的准确性及全部放入反应体系中。 3.要注意酶切加样的次序,一般次序为双蒸馏无菌水、缓冲液、DNA各项试剂,最后才加酶。 4.取酶时,吸头要从酶液的表面吸取,以防止吸头沾上过多的酶液。待用的酶要放在冰浴内,用后盖紧盖子,立即放回-20℃冰箱中,防止酶失活。 5.当样品在37℃保温时
。 (7)在凝胶完全凝固后(于室温放置30-45分钟) ,小心移去梳子和高压灭菌纸带,将凝胶放入电泳槽中。 低熔点琼脂糖凝胶及浓度低于0.5%的琼脂糖凝胶应冷却至4℃,并在冷库中电泳。 (8)加入恰好没过胶面约1mm深的足量电泳缓冲液。 4.加样 DNA样品与所需加样缓冲液混合后,用微量移液器,慢慢将混合物加至样品槽中。此时凝胶已浸没在缓冲液中。 一个加样孔的最大加样量依据DNA的数量及大小而定,一般为20-30μl样品。 已知大小
水 5.1.3 Taq酶 5.2 仪器及用具准备 5.2.1 移液器规格:1-10μl ,20-200μl ,200-1000μl 5.2.2 电动连续加样器 5.2.3 移液器配套吸头,要求灭菌 5.2.4 离心管:1.5ml,要求灭菌 5.2.5 水平式离心机 5.2.6 配套384板的DNA 扩增仪 5.2.7 石腊油、平皿 5.2.8 中性记号笔 5.2.9 手套,规格:乳胶手套,与操作者手形相适应,经灭菌 5.3操作步骤: 5.3.1 换工作服、戴手套 5.3.1.1 从工作
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