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) ②将已配制好的凝胶装入电泳仪中(注意不要漏液)。 ③设计加样顺序,作好实验记录,按预定顺序加样。一般裂解液我们按10-20ul/道点样,重组蛋白按1-2ug/道点样。 ④把电泳装置与电源连接好,将电压调至100V电泳10-20min,待溴酚蓝迁移出积层胶位置再换用200V,30-40min后关闭电源。 ⑤从电泳装置上卸下凝胶玻璃板,用水冲洗干净,准备转膜。 4.转膜(湿转) ① 将凝胶玻璃板置于盛有电泳转移缓冲液的容器中,浸泡几分钟。 ② 带上手套,准备好滤纸和NC
加热3-4min使蛋白变性,方可作为样品点样。(注意:在加热组织裂解液时,肝脏和肾脏组织要特别注意其本身浓度,最好是在制作裂解液时就适当稀释,否则加热后会凝结成固态。还有些组织处理后很粘稠,有带丝状物,这是未裂解的核酸,可以适当离心后再用。) 2、 SDS-聚丙烯酸胺凝胶电泳(SDS-PAGE) ①根据要求配制好SDS-聚丙烯酸胺凝胶(一般釆用10%的SDS-PAGE) ②将已配制好的凝胶装入电泳仪中(注意不要漏液)。 ③设计加样顺序,作好实验记录,按预定顺序加样。一般裂解液我们按10-20ul/道
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