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文献和实验做好准备工作之后,先把旧的培养基倒掉。再用PBS洗两遍,然后加0.05%胰酶/EDTA,剂量根据培养瓶大小定,一般是25cm 2 的瓶子大约0.8-1ml,轻摇10——15秒,使消化液均匀覆盖瓶底即可,再倒掉。置培养箱3-5分钟(看消化效果而定),等大部分细胞呈流沙状滑落时,即加入培养基终止消化,一般以1:5左右的比例传代(视计数结果和看细胞长满的程度而定)。这种方法养比较顽强的细胞很好,既节省步骤,也降低了离心和较长时间消化对细胞带来的损伤,其实大家也可以试试用这种方法养别的细胞。主要做
重大突破!甘波谊团队 Nature 首次报道第三种铁死亡抑制机制,提供抗癌新思路
)使细胞对 GPX4 抑制剂更加敏感;然而,添加尿苷并不影响细胞对 GPX4 抑制剂的敏感性。 图片来源:NatureDHO 和 OA 分别是 DHODH 反应的底物和产物,DHO 和 OA 对铁死亡有着相反的影响,提示 DHODH 可能对于铁死亡有着调节作用。作者发现抑制 DHODH 可诱导 GPX4 低表达的细胞(如 NCI-H226)发生铁死亡;对于 GPX4 高表达的细胞(如 HT-1080),抑制 DHODH 不能显著诱导铁死亡的发生,但能使细胞对铁死亡诱导剂变得更加敏感,而敲除 GPX
是外泌体的纯度和含量很难二者兼得,这是外泌体分离目前一直存在的问题。 不止是脑组织,诸如心肌组织、脊髓组织、骨骼肌组织等都可以经消化分离出外泌体,但是过程中用到的消化液以及实验过程也会有差别,有待进一步优化和探索。也欢迎大家留言合作,一起开发新方法! 参考文献:J Extracell Vesicles. 2017 Jul 26;6(1):1348885. doi: 10.1080/20013078.2017.1348885. eCollection 2017.
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